第八、九讲_酶工程概论.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * 一、概念和种类 酶分子的修饰方法 3 3）酶分子的侧链基团修饰 氨基的化学修饰 羧基的化学修饰 巯基的化学修饰 咪唑基的化学修饰 胍基的化学修饰 色氨酸引哚基的化学修饰 分子内交联 采用一定的方法（化学法）改变酶蛋白的侧链基团。如氨基酸残基侧链基团的化学修饰： * * 第五节 酶的固定化 1. 稳定性差（酶是蛋白质，热、酸碱、有机溶剂对其有影响）。 2.不能回收，只能一次性使用，生产成本提高。 3.产物的分离纯化较困难（产物中混杂酶蛋白）。 ★ 改善方法—固定化技术 1）可提高稳定性。 2）能回收，可反复使用。 3）易与产物分离。 优点： 缺点： 1）存在扩散限制。 2）酶活性下降。 一、概念 游离酶为什么要固定化？ 1 游离酶：未固定直接用于工业生产的酶，与底物作用是一次性的。 一、概念 什么是固定酶immobilized enzyme？ 2 固定在一定载体上并在一定的空间范围内进行催化反应的酶，与反应物作用可多次使用。 水溶性酶 水不溶性载体 水不溶性酶 （固定化酶） 固定化技术化技术 二、酶的固定化方法 1）吸附法 吸附不牢固，酶蛋白活性中心不易被破坏 通过离子键或物理吸附把酶固定于载体上（M—载体） 二、酶的固定化方法 1）吸附法 载体 固定化酶 活性炭 α －淀粉酶、β－淀粉酶、蔗糖转化酶、葡萄糖淀粉酶 多孔玻璃 核糖核酸酶、木瓜蛋白酶、脂肪酶、葡萄糖氧化酶 氧化铝 葡萄糖氧化酶 碳酸钙凝胶 亮氨酸氨肽酶 纤维素 胰蛋白酶、核糖核酸酶 麸素 Β－淀粉液化酶 硅胶 磷酸化酶 二、酶的固定化方法 2）结合法 通过共价键或离子键将酶结合在载体上。 离子键结合法 共价键结合法 结合牢固，酶蛋白活性中心易破坏。 二、酶的固定化方法 3）交联法 将酶吸附在载体上 结合牢固，反应剧烈，酶活力损失大，颗粒较小，使用不方便 用戊二醛（或己二胺）与酶的氨基间交联成网 二、酶的固定化方法 4）包埋法 将酶或含酶菌体包埋在各种多孔载体中。 很好地保存天然酶的活性 凝胶包埋法（包埋在各种凝胶内部的微孔中） 微胶囊法（包埋在由各种高分子聚合物制成的小球内）。 复习巩固： 1.酶分子修饰的主要目的有（ ） A易于固定化 B提高酶的活力 C减少抗原性 D增加稳定性。 2.酶的固定化方法有（ ） A交联 B吸附 C包埋 D 夹层 E结合 3.下列哪些方法不容易破坏酶的活性中心（ ） A交联 B吸附 C包埋 D 结合 4.常用的吸附载体有（ ） A多孔玻璃 B木材 C活性炭 D碳酸钙凝胶 5.酶固定化后的优缺点有哪些？ 优点：1）可提高稳定性； 2）能回收，可反复使用。3）易与产物分离。 缺点：1）存在扩散限制；2）酶活性下降。 BCD ABCE BC ACD * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 四、酶的分离方法 层析分离 4 层析法也称色谱法，是1903年俄国Michael Tswett将植物色素溶液通过装有CaCO3 吸附剂的柱子，然后用石油醚淋洗，各种色素以不同的速率流动后形成不同的色带而被分开。 色谱起源 色谱 组分 色素 石油醚 碳酸钙颗粒 四、酶的分离方法 层析分离 4 层析技术，亦称色谱技术，是一种物理的分离方法。它是利用混合物中各组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两个相中，其中一个相为固定的 称为固定相 ，另一个相则流过此固定相 称为流动相 并使各组分以不同速度移动，从而达到分离。 流动相有两种状态： *液体作为流动相 *气体作为流动相 固定相也有两种状态： *固体吸附剂作为固定相 *以吸附在固体上的液体作为固定相 按两相所处的状态分类： 液相层析 液-固层析 液-液层析 气相层析 气-固层析 气-液层析 四、酶的分离方法 层析分离 4 层析装置： 梯度混和器 蠕动泵 层析柱 监测仪 记录仪 收集器 四、酶的分离方法 层析分离 4 层析方法 分离依据 吸附层析 利用吸附剂对不同物质的吸附力不同而使混合物中各组分分离 分配层析 利用各组分在两相中的分配系数不同，而使各组分分离 离子交换层析 利用离子交换剂上的可解离基团（活性基团）对各种离子的亲和力不同而达到分离目的 凝胶层析 以各种多孔凝胶为固定相，利用流动相中所含各种组分的相对分子质量不同而达到物质分离 亲和层析 利用生物分子与配基之间所具有的专一而又可逆的亲和力，使生物分子分离纯化 层析聚焦 将酶等两性物质的等电点特性与离子交换层析的特性结合在一起，实现组分分离 四、酶的分离方法 层析分离 4 将吸附剂装在吸附柱中，装置成吸附层析柱。 层析时，欲分离的混合溶液自柱顶加入，当样品液全部进入吸附层析柱后，