蛋白质分离纯化与鉴定—综合性实验讲义.pptVIP

蛋白质分离纯化与鉴定—综合性实验 三峡大学医学院生物化学教研室 * * 1、从血清获得高纯度的白蛋白 2、掌握蛋白质盐析、 G-25葡聚糖凝胶层析脱盐、DEAE-纤维素离子交换层析、 SDS电泳的原理与实验操作技术 3、掌握考马斯亮蓝G250染色法定量检测蛋白质的原理和操作方法 4、了解紫外检测仪、自动部分收集器、记录仪、恒压高位槽的原理与使用方法 实验目的 实验流程 蛋白质盐析 葡聚糖凝胶Ｇ-25（脱盐） DEAE-Cellulose离子交换（纯化） 蛋白质浓度检测 SDS电泳法 （鉴定蛋白质纯度） 柱层析实验装置 UV monitor Recorder Fraction Collector Column Buffer Reservoir 柱层析实验 仪器一：HD-3紫外检测仪 波长 光量 灵敏度 电源 调零 根据光吸收原理设计，光源为紫外光，可监测具有紫外吸收物质(蛋白质、核酸、多肽、酶)的检测仪器，与层析柱、部份收集器及记录仪配套，组成一个完整的液相色谱分离分析装置。 构造和功能 1. 检查：连接是否正确，将“波长”旋钮旋到所需波长刻度； 2. 预热：按下 “电源”开关，电源指示灯亮； 3. 调100%：把“灵敏度”旋钮选择到“100％”档，调节“光量”旋钮，数字显示为100，即透光率为100％； 4. 调零：把“灵敏度” 旋到所需档（使用者自行掌握），缓慢调