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第二节动物细胞工程 动物细胞融合 四、单克隆抗体 利用淋巴细胞产生抗体 利用肿瘤细胞无限增殖 利用细胞融合将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养大量培养杂交瘤细胞 * 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体技术 核移植 动物细胞工程常用技术 1.定义：p44 从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖. 一、动物细胞培养 动物的组织 胰蛋白酶 剪碎 单个细胞 加培养液 制成 细胞悬液 原代培养 “癌变”遗传物质改变 动物细胞培养不能 最终培养成动物体 10代细胞 传代培养 细胞贴壁 分瓶 细胞 2.过程：44~45 阅读 胰蛋白酶 50代细胞 1、植物组织培养将组织分散成单个细胞吗？ 3、为何动物细胞培养将组织分散成单个细胞呢？ 2、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？ 没有 成块组织细胞靠在一起,限制了细胞的生长和增殖 先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理。 思考题 5、细胞膜的主要成份是什么？ 6、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？ 7、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？ 蛋白质和磷脂 能 注意时间的控制 8、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？ 9、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？ 不能，因为两者的最适pH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适pH较接近 胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛 10、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？ 11、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？ 12、细胞数量未达到人们的需求，应该怎样办？ 易于细胞贴壁，进行生长增殖 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触，这种现象叫接触抑制。 将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后分瓶。 传代培养 13、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？ 10代以内的细胞保持正常二倍体核型； 10－50部分细胞的核型可能发生变化。 ＞50代细胞发生突变，向癌细胞方向发展 14、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体 3.动物细胞培养的条件:p46 .无菌无毒 .营养：加血清、血浆 .温度和pH：36.5左右、PH=7.2~7.4 .气体:主要CO2、O2 模拟动物体细胞生活的内环境 4.动物细胞培养应用: 生物制品的生产 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体 检测有毒物质 细胞的生理、药理、病理研究 思考： 1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培养基有何独特之处？ 3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样培养成新个体？ 成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。 独特：1、液体培养基 2、成分中有动物血清等 成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养 不能，动物细胞培养只能使细胞增多，不能发育成新的动物个体 卵细胞 Ａ母绵羊 Ｂ母绵羊 乳腺细胞 细胞核移植 早期胚胎 卵裂 C母绵羊子宫 胚胎移植 多莉羊 分娩 妊娠 多莉羊的培育过程 融合后的卵细胞 二、核移植技术和克隆 p47 将动物的一个细胞的细胞核,移入一个去核的卵母细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,最终发育为新个体（克隆动物）. 1、定义： 2、原理： 动物细胞核的全能性 3、分类： 胚胎细胞核移植 体细胞核移植 4、过程p48 （MⅡ卵母细胞） 去核的卵母细胞 胚胎移植 供体细胞注入去核卵母细胞 激活受体细胞，完成分裂、发育 4、过程p48 供体 体细胞 培养 卵母细胞 体外培养 减Ⅱ中期 去核 供体细胞 去核卵母细胞 细胞融合 重组胚胎 移入代孕母体内 生出与供体遗传物质相同的个体 5.体细胞核移植的应用 p49 加速遗传改良、促进优良繁育 保护濒危物种 生产医用蛋白 组织器官移植 6、核移植存在问题：p50 成功率低 健康 食品安全 三、动物细胞融合p52 受精作用 1、定义： 两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程 2、原理： 细胞膜的流动性 3、方法： 物理：电激 化学：聚乙二醇（PEG） 生物：灭活病毒 思考讨论： p52左下角 细胞融合使用的病毒要灭活？不灭活行吗？ 不灭活会感染细胞，而不能诱导细胞融合。 4、过程：p52 细胞核 病毒颗粒 细胞核 杂交细胞 5、应用 p52 、简述抗体产生的途径？ 刺激 浆细胞 抗原 动物体 抗体 .一个Ｂ淋巴细胞(浆)能分泌多种抗体吗？ .人体有多少种抗体? .从动物体直接提取抗体,最大问题是什么? 问题 不用记 一个Ｂ淋巴细