细胞融合技术精读.ppt

第三节 本节目标 1．通过阅读了解细胞融合技术的一般原理，知道细胞融合的几种诱导方法。2．掌握细胞融合技术在育种上的应用，比较细胞融合技术育种与常规的杂交育种的优缺点。3．提出自己的单克隆抗体的制备方案，通过讨论和相互评价，在自主探究中，掌握单克隆抗体的制备技术及应用，体验科学家的科学探索过程。 4、植物体细胞杂交及应用 【重点、难点】 1、细胞融合技术的一般原理，知道细胞融合的几种诱导方法。2、单克隆抗体的制备方案。3、植物体细胞杂交及应用 一.细胞融合技术 阅读课本第30-31页内容，回答问题： 1.什么叫细胞融合技术？ 2.常用的人工诱导细胞融合的方法有哪几种？哪一种重复性强，对原生质体伤害小，方法简单，可控性强？ 细胞电融合仪 * * 细胞融合技术 用人工方法诱导细胞融合，并在一定条件下使融合细胞 分化再生，形成新物种或新品种的过程。 物理法：离心、振动、电融合技术（电刺激。伤害小，可控性强） 化学法：用聚乙二醇（ＰＥＧ）诱导 灭活的病毒：仙台病毒、疱疹病毒等（适合动物） 动物细胞融合（细胞杂交）－2个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程 细胞A 细胞B 杂种细胞 灭活的病毒 物理法 化学法 仙台病毒 疱疹病毒 新城鸡瘟病毒 融合后形成的细胞称为杂交细胞 用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程 细胞核 病毒颗粒 细胞核 抗体是由何种细胞产生的？ 2 . 抗体是如何产生的？ ？ 二.动物细胞融合与单克隆抗体 读下面一段文字资料，思考以下问题： 长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏。人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。 1、请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念 用单个B细胞进行克隆，得到的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。 （一）单克隆抗体概念 1、如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？ 单克隆抗体 问题讨论 提示： 1 .什么样的细胞可以产生抗体？ 2 . 什么样的细胞可以无限增殖？ 设计方案： 一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖 杂种细胞 单克隆抗体 B淋巴细胞 注射特定抗原蛋白 骨髓瘤细胞 培养骨髓瘤细胞 融合 （只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？融合细胞几种类型？ 骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞 B淋巴细胞--- B淋巴细胞 B淋巴细胞---骨髓瘤细胞 多种杂交细胞 在具有筛选作用的培养基上培养 专一抗体检验阳性 克隆上述杂交细胞 分开不同杂交细胞，克隆专一抗体， 检验阳性细胞 单克隆抗体 注射到小鼠体内 体外培养 （二）、单克隆抗体的制备过程 第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。 第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。 该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。 杂交瘤细胞有何特点？ 特异性强，灵敏度高 腹腔注射法 ①诊断疾病（识别作用，如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等） （三）单克隆抗体的应用 优点：准确、高效、简易、快速 ②用于治疗疾病和运载药物（主要用于癌症治疗，也可运载药物，如 “生物导弹”） （导向作用，作为载体，生物导弹 单克隆抗体+药物，治疗肿瘤） （位置准确、疗效高、副作用小） 诊断乳腺癌单克隆抗体 小结 两个过程 动物细胞融合过程 动物细胞培养过程 “一二三” 二次筛选—筛选杂交瘤细胞、能 产生所需抗体的杂交瘤细胞 一个新细胞——杂交瘤细胞 三个优势——产量大、特异性强、灵敏度高 理化性质单一 的优势 单克隆抗体 三、植物体细胞杂交技术与作物育种 杂交的两个细胞 用纤维素酶、果胶酶处理细胞壁（酶解法） 原生质体Ａ、Ｂ 经离心、振动、电刺激 用聚乙二醇（ＰＥＧ）诱导 融合后的原生质体 再生细胞壁 杂种细胞 脱分化 细胞分裂 愈伤组织 杂种植株 再分化 （植物体细胞融合完成的标志） 植物细胞融合 植物组织培养 白菜 甘蓝 白菜－甘蓝 植物体细胞杂交意义？p33 细胞融合技术可以避免受精过程，在亲缘关系较远的物种间实现基因转移，创造出自然界没有的新物种。 意义：克服远缘杂交不亲和的障碍， 实现种间遗传物质的重组 2、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？ 3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？ 离心、振动、电激等物理方法；聚乙二醇诱导等化学方法 问题讨论 动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中不须去除细胞壁