基因工程-第二章基因工程工具酶详解.ppt

第二章 基因工程工具酶 第一节 限制性核酸内切酶 限制性核酸内切酶 是一类能够识别双链DNA 分子中的某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的核酸内切酶。 一、宿主的限制和修饰现象----发现 1952～1953年在T偶数噬菌体和λ 噬菌体对大肠杆菌的感染实验中研究者发现了细菌的限制和修饰现象。正是对限制和修饰现象的深入研究，导致限制性内切核酸酶的发现。 二、限制性核酸内切酶的类型 根据其识别和切割序列的特性、催化条件及修饰活性等，一般将限制酶分为I，Ⅱ，Ⅲ 三大类。 I 类：不适用于基因工程。只在肠道菌中发现。 Ⅱ类：基因工程的工具酶。 Ⅲ类：切割位点不在识别位点，一般离识别位点24 bp～ 26 bp，对分子克隆操作亦无实用意义。 已有超过1200种。 三、限制性核酸内切酶的命名 H.D.Smith等于1973年提议的命名系统。 名称的第个1字母取自它来源细菌属名的第1个字母，大写； 第2，3二个字母取自它来源细菌的种名的头2个字母，小写； 如果它的来源菌还有株系，则有第4个字母；若酶的编码基因位于噬菌体或质粒上，则用一个大写字母表示此染色体外的遗传成分； 最后用大写罗马数字，代表同一菌株中不同限制酶的编号。 前三个字母用斜体表示。 通常情况下，需要对克隆的DNA进行切割。 首先，如果以克隆单个基因为目的，该单个基因可能仅仅包含2-3kb DNA，则