色谱联用技术(LC-MS)预案.ppt

高效液相色谱－质谱（HPLC-MS）联用技术 HPLC-MS是近些年出现的联用仪器，发展非常迅速，弥补了GC-MS只能测定挥发性或半挥发性物质的不足，使色谱－质谱联用技术得到了完善。 GC-MS由于接口技术技术难度相对较小，因此，开发使用较早，而HPLC－MS接口技术技术难度较大，开发使用较晚。 HPLC-MS所提供的信息与GC-MS相同（TIC、MC、SIM、全扫描三维图等）。 HPLC-MS的特点： MS作为LC的检测器不仅能得到色谱数据，如：峰保留时间、峰高、峰面积等，同时亦可得到质谱信息。具体如下： 1、质谱为通用性检测器，可测定不带生色团或荧光基团的化合物； 2、质谱也是选择性检测器，用选择离子检测可一次完成定性、定量分析，且灵敏度很高。 1. 接口的重要性 接口是HPLC与质量分析器之间的过渡装置并承担着离子化的任务。 由于MS需在真空下操作，以便完成离子形成、分离、检测的过程。但是HPLC出口含有大量的流动相（溶剂）（0.2～2mL/min）。 大量的流动相不得进入MS ？HPLC的流动相处在高压下，液体气化成气体，其膨胀系数约为1000倍以上。1mL流动相液体可气化成1000mL气体。流动相的去除是接口的主要任务之一。 不如GC-MS接口成熟，历史较短。 2. 接口的种类（离子化方法） 热喷雾 快原子轰击（FAB） 电喷雾(API-±EI、ESI) √ 大气压化学源(API-±CI、APCI) √ 大气压光电离源(APPI) 粒子束 [Sol+H]+＋M → [M＋H] +＋ Sol （质子转移） 或 [Sol+H]－＋M → [M＋H]－ ＋ Sol Sol+＋M → M+ ＋Sol 或 Sol－ ＋MH → M－ ＋SH （质子抽出） ▲很少产生碎片，离子流集中在几种离子形式（一般为准分子离子），所以灵敏度高。 ▲信息量少。 ▲适用于有一定挥发性的中等极性或弱极性的样品，分子量2000以下。 ▲允许使用流速高及含水量高的流动相；极易与RP－HPLC匹配。 电喷雾是一种“软”电离技术，通常只形成准分子离子，提供分子量信息。但是在实际工作中，特别是对未知化合物的分析，不仅需要分子量，而且更需要尽可能多的化合物碎片信息。 碰撞诱导解离（CID）可解决这一不足。 各种扫描方式的原理解释： Q1 Full Scan (Start – Stop)(Q1全扫描) Q1 always used as single MS analyzer Used primarily for ident. of precursor ion SIM - Selected Ion Monitoring(选择离子监测) Used to optimize analyzer for specific ions SIM used for quantitative analyses Q1 SIM used to “optimize” precursor ion Maximize signal in preparation for MS/MS 选择离子监测： SIM用于检测已知或目标化合物，比全扫描方式能得到更高的灵敏度。这种数据采集的方式一般用于定量。 若几种目标化合物用同样的数据采集方式监测，那么可以同时测定几种离子. Precursor Ion Scan(母离子扫描) Q1 sweeps a given mass range, Q3 is fixed Used to determine the “origin” of particular product ion(s) created in the collision cell Frequently used for drug metabolite identification (common product ion observed in the metabolites) 母离子扫描的作用 母离子分析可用来鉴定和确认类型已知的化合物，尽管它们的母离子的质量可以不同，但在分裂过程中会生成共同的子离子，这种扫描功能在药物代谢研究中十分重要。 Product Ion Scan(子离子扫描) Example of Product Ion Spectrum 中性丢失扫描 中性丢失扫描分析可用来鉴定和确认类型已知的化合物，也可以帮助进行未知物结构判断。 例如：18