分解纤维素的微生物的分离详解.ppt

纤维素生物燃料：最有希望替代石油能源 1、在草食性动物等的消化道内，也共生有分解纤维素的微生物，其原理也是产生纤维素酶而分解纤维素，而人没有分解纤维素的能力。 2、农作物秸秆：米秸、麦秸、稻草、草、木屑 等富含大量的纤维素，被利用的机会很少、效率低； 课题3　分解纤维素的微生物的分离 一、实 验 设 计 四、结果分析与评价 纤维素： 棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物； 纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质，植物每年产生的纤维素超过70亿吨；分布植物的根、茎、叶中； 科学家正致力于研究，怎样将农业废弃物、木材及生长更为迅速的草本植物，转化为种类繁多的生物燃料（甚至是航空燃油）。 （一）纤维素与纤维素酶 纤维素：一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，广泛地存在于植物的根、茎、叶等器官中。 纤维素酶：由微生物分泌的一种复合酶，包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，由于它们的协同作用，最终将纤维素分解成葡萄糖。 纤维素 C1酶 Cx酶 纤维二糖 葡萄糖苷 酶 葡萄糖 ①取二支20mL的试管 实验：纤维素酶分解纤维素的实验 ②各加入一张滤纸条 ③各加入10mL0.1mol/L的醋酸－ 醋酸钠缓冲液 甲 乙 ④在甲试管中加入1mL蒸馏水， 乙试管加入1mL纤维素酶 ⑤将试管放在140r/min的摇床上振荡1h ⑥结果：乙试管的滤纸条消失 讨论： 乙试管的滤纸条为什么会消失？甲试管的作用是什么？ 刚果红染色法 刚果红能与像纤维素的多糖形成红色复合物，而不与水解后的纤维二糖和葡萄糖发生该反应。 （二）纤维素分解菌的筛选 用加入刚果红的纤维素培养基去培养微生物时，如果培养基中出现以菌落为中心的透明圈时，可说明该菌落是纤维素分解菌，因为它已将被刚 果红 染成红色的纤维素分解了。 请你根据实验流程图和提供的三个资料以及“操作提示”，在思考有关问题的基础上，设计出一个详细的实验方案。 土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布在鉴别纤 维素分解菌的培养基上 筛选产生透 明圈的菌落 * ①取样环境 1、土壤取样： 富含纤维素的环境（树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等） 操作步骤 ②讨论:如果找不到合适的环境，可以将滤纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋在土壤中多深？ 将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将滤纸埋于深约10cm左右的土壤中。 2、选择培养 增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离所需要的微生物。 ①目的： ②制备选择培养基 ③操作： P29 培养基成分分析 水 溶解后，蒸馏水定容至1000mL 氮素、生长因子 水解酵素 0.5g 生长因子、碳源、氮源 酵母膏 0.5g 无机盐 KCl 0.5g Na2HPO4·7H2O 1.2g KH2PO4 0.9g MgSO4 ·7H2O 0.5g 氮源、无机盐 NaNO3 1g 碳源（能源） 纤维素粉 5g 提供主要的营养物质 培养基组成 提示： 自变量为培养基的种类，即完全培养基和选择培养基。 可用完全培养基做对照,或将纤维素改为葡萄糖。 A、旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？ 是液体培养基，原因是配方中无凝固剂（琼脂） B、这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？ 有选择作用，本配方中纤维素作为主要碳源，只有能分解纤维素的微生物可以大量繁殖。 C、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用 说明：分析“纤维素分解菌的选择培养基配方”可知，该配方中的酵母膏也能够提供少量的碳源，因此其他微生物也能在该培养基中生长繁殖。但因酵母膏的含量极少，因此，只有以纤维素为碳源的微生物才能大量繁殖。 在选择培养的条件下，可以使那些能够适应该营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用。 为什么选择培养能够“浓缩”所需微生物？ 按照课题1的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释101～107倍。 3.梯度稀释 101 102 103 104 105 106 4.将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 （1）制备鉴别培养基P29 （2）涂布平板： 将稀释度为104～106的菌悬液各取0.1ml涂布到平板培养基上，30℃倒置培养。 氢元素、氧元素 上述物质溶解后，加蒸馏水定容至1000mL 凝固剂 琼脂