第14章.同位标记技术在分子生物学实验技术中的应用.pptVIP

DNA序列分析 DNA序列分析自动化 用四甲基若丹明(Tetramethylrhodamine)作为荧光剂标记DNA引物，带有这种引物的DNA片段能在激光诱导下发出荧光。按照标准的双脱氧终止法或化学终止法进行测序反应，跑DNA凝胶后用计算机检测。 荧光标记物 ddGTP ddATP ddTTP ddCTP 单泳道电泳及信号收集 正极 负极 计算机排序 5ˊ GS FLX系统超高通量测序技术原理 GS FLX系统的测序原理和GS 20一样，也是一种依靠生物发光进行DNA序列分析的新技术：在DNA聚合酶，ATP硫酸化酶，荧光素酶和双磷酸酶的协同作用下，将引物上每一个dNTP的聚合与一次荧光信号释放偶联起来 (图 1)。通过检测荧光信号释放的有无和强度，就可以达到实时测定DNA序列的目的。此技术不需要荧光标记的引物或核酸探针，也不需要进行电泳；具有分析结果快速、准确、灵敏度高和自动化的特点。  GS FLX系统的操作过程 GS FLX系统提供了完整的从样品制备到后续的生物信息学分析解决方案。 1）样品种类：GS FLX系统支持各种不同来源的样品序列测定：包括基因组DNA，PCR产物，BAC，cDNA，小分子RNA等等。 2）样品DNA打断：样品例如基因组DNA或者BAC等被打断成300－800