大肠菌群测定详解.pptVIP

奶粉的大肠菌群检验方法 实验材料 检测样品：奶粉 设备和材料：恒温培养箱、天平、摇床、无菌移液管（1ml）、无菌锥形瓶、无菌试管、小倒管、精密pH试纸 培养基和试剂：LST肉汤、BGLB肉汤、无菌生理盐水、1mol/L NaOH 、1mol/L HCl 实验步骤：前期准备 每个小组准备器材：移液管1mlX6、10mlX2、锥形瓶500mlX2、试管X14 准备试剂： 配制：LST肉汤（1000ml）和BGLB肉汤 生理盐水（500ml） 相关配方 实验步骤：前期准备 将相关玻璃仪器进行灭菌前包装 将配制好的LST肉汤加入试管中（注意1），然后小心将小倒管放入肉汤中（注意2）（每组10支） 将所有东西包扎好放入灭菌锅中灭菌20min 称取25g样品→加入225ml生理盐水中→摇床匀质→制成1:10样品匀液 取一支无菌试管+9ml生理盐水→+1ml1:10样品→制成1:100稀释液 如2方法制成1:1000稀释液（注意3） 分别标注好标号 用1ml无菌移液管分别吸取3个稀释度的稀释样品至LST肉汤发酵试管中（每一稀释度3管） 将LTS发酵管取出，观察倒管是否有气泡，将初发酵产气的管数种类进行记录 准备BGLB肉汤发酵管（分装、灭菌等） 用接种环接一环产气的LTS发酵管至BGLB发酵管中，并记号 放进培养箱培养48h 取出观察倒管是否产气，如果两种发酵管均产气则证实为大肠菌群阳性，并根据管数查MPN检测表（P142-143），得出MPN值 初发酵和证实试验： 1）两步法进行了两次乳糖发酵试验。初发酵和证实实验所用培养基不同，但都是为了证实培养物是否符合大肠菌群的定义，即“在37℃分解乳糖产酸产气”。 LST中提供了磷酸盐缓冲体系，氯化钠可维持渗透压，月桂基硫酸钠可抑制非大肠菌群的生长，这个缓冲蛋白胨乳糖肉汤允许“缓慢乳糖发酵（Slow lactose fermentations）”来促进菌体产气。BGLB中胆盐和煌绿可以抑制革兰氏阳性细菌和除了大肠菌群的很多革兰氏阴性细菌。 2）初发酵阳性管，不能肯定就是大肠菌群细菌，经过证实试验后，有时可能成为阴性。有数据表明，食品中大肠菌群检验步骤的符合率，初发酵与证实试验相差较大。因此，在实际检测工作中，证实试验是必需的。 数据记录 记录初发酵与复发酵的产气管数以及实验现象 MPN值查询 讨论实验结果（与其他组比较） 大肠菌群的定义 大肠菌群：一群在37℃，经24h能发酵乳糖，并产酸产气，需氧或兼性厌氧生长的革兰氏阴性的无芽孢杆菌。 其中包括有大肠杆菌（也称大肠埃希氏菌）、肠杆菌属、枸橼酸菌属、克雷伯氏菌属中的一部分和沙门氏菌属的第Ⅲ亚属。 P139 大肠杆菌的定义 大肠杆菌指革兰氏阴性无芽孢杆菌、乳糖发酵产酸产气、IMViC试验（靛基质、MR、V-P、柠檬酸盐试验）为++--或-+--的细菌。 大肠杆菌（也称大肠埃希氏菌），分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属。 与人类有关的大肠杆菌统称为致泻性大肠杆菌，包括五种：肠毒素性大肠杆菌（ETEC）、致病性大肠杆菌（EPEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）、侵袭性大肠杆菌（EIEC）、黏附性大肠杆菌（EAEC）。 大肠菌群和大肠杆菌的关系 耐热大肠菌群的定义：能在液体乳糖培养基中35/37 ℃ 培养48h产酸产气，并在44.5℃培养24h产酸产气的细菌（依据ISO标准） 卫生学意义 大肠菌群和大肠杆菌作为食品卫生标准的意义在于，是评价卫生质量的重要指标，作为食品中的粪便污染指标。 另外，肠道致病菌如沙门氏菌属和志贺氏菌属等，对食品安全性威胁很大。经常检验致病菌有一定困难。而食品中的大肠菌群较容易检出，肠道致病菌与大肠菌群的来源相同，而且在一般条件下大肠菌群在外环境中生存时间也与主要肠道致病菌一致．所以大肠菌群的另一重要食品卫生意义是作为肠道致病菌污染食品的指示菌． 大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。 大肠杆菌的生物学特性 基本形态： 此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般约0.5-0.8μm*1.0-3.0 μm，多单独存在或成双，但不呈长链排列。约50%的菌株有周生鞭毛，但多数只有1-4根，一般不超过10根，故菌体动力弱。多数菌株有菌毛，有的有荚膜或微荚膜，不形成芽孢，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。 大肠杆菌的生物学特性 培养特性： 大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、铵盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。最适生长温度为37℃，在42-44 ℃条件下仍能生长，生长温度范围15-46 ℃。 在普通营养琼脂上有3种菌落形态： 1）光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、 光滑、呈灰色，在生理