低蛋白高纯度刺参多糖的研制--创新项目.docVIP

山东省技术创新项目 可行性研究报告 项 目 名 称：低蛋白高纯度刺参多糖制备方法的研究及产品设计 项目承担单位：好当家集团有限公司 山东省科学院生物研究所 2013年1月 一、国内外相关产品与技术发展水平、现状 多糖是所有生命有机体的重要组分，并在控制细胞分裂、调节细胞生长以及维持生命有机体正常代谢等方面具有重要作用。因此，有关多糖的研究越来越受到研究人员的关注和重视。海参多糖是海参体壁的重要组成成分， 近20 年来，国内外对海参多糖，特别是海参黏多糖及其异构物的药理作用进行研究，证实它有多种药效：（1）增强免疫力。刺参酸性黏多糖能使人白细胞悬浮物中的E花环数量增加，SMIg的表达减少，这是因为它作用于无活性细胞亚群，致使活性的T细胞增加，从而抑制了B细胞活化和SMIg的表达。花刺参多糖对鼻咽癌患者T调节细胞亚群的T4和T8细胞均有明显的诱导和激活作用，两者细胞数量分别增加44.1%和29.1%，且T4细胞增加百分率较T8细胞高。花刺参多糖浓度为5-80mg/mL时，对诱导第4d 时的T4和T8阳性细胞数的变化与药物浓度呈正相关。（2）抑制肿瘤。黏多糖对多种实验动物肿瘤的生长具有抑制作用，对MA-737 乳腺癌和T-795肺癌生长抑制率分别高达79%和60%以上，并能够抑制MA-737乳腺癌的转移和Lewsi肺癌自然转移。小鼠腹腔注射刺参内脏多糖40mg/mL，对小鼠MA-737乳腺癌和艾氏实体癌的抑制率分别为24.5%和41.2%。刺参粘多糖能抑制小鼠S180肉瘤和乳腺癌细胞的DNA合成，但促进肝细胞的DNA合成。Moon 研究了刺参中提取的黏多糖和硫酸软骨素对几种药物所致突变的作用，发现对于黄曲霉素和3，2-二甲基-4-氨基二酚的抑制率分别为84%和98%。（3）抗凝血。刺参多糖有抗凝血作用，刺参体壁黏多糖在体外有明显的抑制血小板解聚作用。Nagase 对降解的海参黏多糖进行研究，观察它用于防治凝血酶诱导的兔血栓形成时，发现其抗Xa的活性不依赖于AT-III肝素辅助因子。黏多糖作为一种新型抗凝剂，在凝血过程的不同环节显示多重作用，在正常情况下，黏多糖抗凝活性低于肝素，但在抗凝剂机理和安全性等方面优于肝素。（4）促进纤维蛋白溶解。海参黏多糖可通过激活纤溶酶原而促进纤维蛋白溶解，同时还能抑制纤维蛋白的单体间聚合、改变纤维蛋白凝块结构，从而有利于药物纤溶。（5）降低血黏度。海参多糖在正常中老年人群（48-72岁）中试用具有降低全血黏度及血浆黏度的作用，同时显示还有调节血脂的功能，即降低血清胆固醇和甘油三酯水平，升高载脂蛋白A 并降低载脂蛋白B。（6）保护神经组织。海参多糖在体外培养的大鼠皮质神经元试验中，对以β-淀粉样蛋白诱导引起的皮质神经元的损伤或凋亡具有明显的保护作用，海参多糖能防止中枢神经元的退行性病变，例如早老性痴呆症。（7）抑制细菌感染。海参多糖能对抗单纯疱疹病毒所引起的组织培养细胞的特异性病变，同时明显抑制HIV对培养细胞的感染率。另外，海参多糖在慢性肝炎患者“三阳”，及恢复肝功能方面较常规药物治疗效果更佳。 海参多糖在海参体壁中以糖肽键与蛋白相连。蛋白是影响海参多糖品质的主要杂质，采用适当方法降低产物中蛋白含量是制备高纯度海参多糖的关键。去除蛋白的方法有多种，通常采用Sevage法及三氯乙酸法等，然而这些方法在去除蛋白时效率低，同时会造成多糖的大量损失，不利于产业化生产。有文献报道采用酶解结合超滤技术制备海参多糖（酶解法制备低蛋白含量海参多糖条件的研究，中国食品学报，2011年10月，第11卷，第7期），这种方法制备出的海参多糖蛋白含量低，是一种较为可行的生产方法。本项目采用酶解-超滤-酶解-超滤偶联法制备海参多糖，提取所得多糖蛋白含量极低，具有纯度高，免疫原性低等特性，是一种很有前景的制备注射用海参多糖的生产方法。 二、项目立项的必要性 刺参多糖是继手术、放疗和化疗三大治疗手段之后的第四类治疗肿瘤的药物，它通过增强机体的抗肿瘤免疫防御反应或改变机体对肿瘤细胞的生物学效应而产生机体或细胞介导的抗肿瘤效果，发挥间接的抗肿瘤作用。刺参多糖一般可与化疗药物联合使用，将来可广泛用于癌症的辅助治疗。 同时刺参多糖具有抗凝血、调节免疫功能。刺参多糖在体外有明显的抑制血小板解聚作用。刺参多糖作为一种新型抗凝剂，在凝血过程的不同环节显示多重作用，在正常情况下，刺参多糖抗凝活性低于肝素，但在抗凝剂机理和安全性等方面优于肝素。 三、实施方案 1 技术特点、关键技术、工艺 技术特点： 本发明利用干海参作为提取材料，首先，将干海参粉碎至100-300目之间，粉碎后的海参利用正己烷、丙酮或石油醚进行脱脂处理，脱脂后利用乙醇或甲醇进行提取，去除皂苷类成分，经过脱脂、脱皂苷的海参粉浸入于纯净水中，利用蛋白水解酶（内切酶）酶解，酶解液离心，上清