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实验一：实验动物生物材料采集和制备 指导教师：冯斐斐 Email：feifeifeng@zzu.edu.cn 卫生毒理学教研室 实验意义 在卫生毒理学实验中，为研究实验动物接触毒物的毒效应，经常需要测定血液、尿液、组织匀浆等实验动物生物材料中受试化合物的浓度，确定其代谢产物的性质和含量，分析外来化合物质对组织脏器的影响，实验动物生物材料采集和制备是卫生毒理学的重要基础技术。 需要采集的生物样品主要是血液和尿液及组织脏器，它是反映受试物的生物学效应及物质在体内代谢情况的最为重要的途径。 实验目的 掌握常用的实验动物生物材料采集和制备方法。 实验动物：大鼠、小鼠 器材：大小鼠固定板 实验剪刀 实验镊子 匀浆仪器 玻璃毛细管 大鼠代谢笼 试剂： 生理盐水 乙醚 仪器和器械 实验内容 1. 动物常用采血方法 2. 动物尿液的收集 3.实验动物血清与血细胞分离技术 4.匀浆制备技术 1. 动物常用采血方法 实验内容 (1) 大、小鼠鼠尾采血方法：适用于需血量少的实验。方法：将动物固定后，把鼠尾浸入到45-50度得温水中使尾静脉充血，擦干皮肤后，再用酒精棉球擦拭消毒。剪去鼠尾（约0.2-0.3厘米），拭去第一滴血，吸取一定量尾血，然后用棉球压迫止血。 （2）眼眶静脉丛采血法：以左手拇指、食指紧紧握住大鼠或小鼠颈部压迫颈部两侧使眶后静脉丛充血（注意用力要恰当，以防止动物窒息死亡），右手持玻璃毛细管从一侧眼内呲部以45度角刺入，捻转前进。如无阻力继续刺入，直到出血为止。右手持容器收集血液后，拔出毛细管，用干棉球压迫止血。 （3）断头采血法：该法可用于大、小鼠。左手握住动物，右手持剪刀，快速剪断头颈部，倒立动物将血液滴入容器。注意防止剪断的毛发掉入接血的容器中。也可用大鼠断头器断头后，倒立动物接血。 实验内容 （4）腹主动脉或股动（静）脉采血法： 为一次性采血方法。大小鼠麻醉后，仰卧位固定动物，剪开腹腔，剥离暴露腹主动脉或股动（静）脉，用注射器刺入采血。 （5）家兔耳缘静脉采血法： 家兔在兔盒中固定，拔掉一侧耳缘部细毛，轻轻以手指弹耳，使耳缘静脉充血，酒精消毒。左手压迫耳根，右手持阵刺破静脉收集血液；或直接用注射器进针，耳缘静脉采血。 （6）心脏采血法: 将动物以仰卧位固定，于肋部近胸骨左缘出，手触心搏最强部位进针，采血。采血毕迅速拔针，用酒精棉球压迫止血。 实验内容 2. 动物尿液的收集： 收集大动物与小动物的尿液，一般使用不同的代谢笼。代谢笼主要由备有动物饮水和装饲料的笼体、粪尿分离器和收集尿液容器组成。一般笼体为金属和铁丝制成，如实验要求防止金属污染时，则代谢笼应用玻璃或有机玻璃制作。 兔、狗等大动物也可用导尿法收集尿液。 为了使收集的实验动物尿液满足实验需要，可在收集尿前给动物一定量的水，如大鼠可先行灌胃1-5毫升的水。 3.血浆制品的制配： 实验内容 （1）红细胞、白细胞制备 （2）血清制备 （3）全血，即抗凝血 （4）血浆制备 4.匀浆制备技术： 实验内容 1 小鼠断颈放血处死,迅速取其肝脏, 2 置冰冷的生理盐水中反复冲洗,剔除脂肪及结缔组织,3 滤纸吸干表面水分后称重1克,（根据你需要来）。4 放在平皿中加入适量的冷生理盐水（肝：生理盐水为1:4）, 剪碎，然后转移到匀浆器中，匀浆。 实验注意事项 1.抓取动物时应规范小心，避免被动物抓伤或咬伤。 2.应根据具体实验的用血量而决定采用何种采血方式。 3.实验动物每次采血量不能过多。 4.撰写实验报告。