分子生物学常用试剂及配制方法.doc

分子生物学常用试剂的配制 1．LB(Luria-Bertani)培养液、平板的配制 配制每升LB培养液，应在950ml去离子水中加入： 细菌培养用酵母提取物（bacto-yeastextract） 5g 细菌培养用胰化蛋白胨（bacto-tryptone）10g NaCl? 10g 摇动容器直至溶质完全溶解，用5mol/LNaOH(约0.2ml)调节pH值至7.0，加入去离子水至总体积为1L，在 15 1bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌 20min。 LB 琼脂平板的配制： 先按上述配方配制液体培养基，临高压灭菌前加入琼脂糖 15g /L，同法高压蒸汽灭菌 20min。从高压灭菌器取出培养基时应轻轻旋动以使熔解的琼脂糖能均匀分布于整个培养基溶液中，应使培养基降温至50时，加入抗生素等不耐热的物质。为避免产生气泡，混匀培养基时应采取旋动的方式，然后可直接从烧瓶中倾出培养基铺制平板。90mm直径的培养皿约需30－50ml培养基，培养基完全凝结后，应倒置平皿并贮存于4备用。 2．琼脂糖凝胶的配制 根据所需凝胶的浓度秤取琼脂糖，加入相应电泳缓冲液中，用微波炉加热煮沸至琼脂糖完全溶解，加入适量 EB 混匀，适当冷却后倾入凝胶铸槽中，插入梳子，凝胶厚度不超过梳孔，如有气泡产生则用玻璃棒驱除，不能过早拔除梳子，应待凝胶完全凝结后才能拔除梳子。 3．P1、P2、P3的配制P1 的配制：在 800ml 去离子水中溶入 Tris 碱 6.06g，Na2EDTA·2H2O 3.72g，用 HCl 调整 pH 至 8.0，用去离子水调整容积至1升，每升P1内加入RNaseA100mg。 P2 的配制：在 950ml 去离子水中溶入 NaOH 8.0g，20％SDS 50ml，调整容积至 1 升。 P3 的配制：在 500ml 去离子水中溶入醋酸钾 294.5g，用冰醋酸调整 pH 值至 5.5，用去离子水调整容积至1升。 4．常用缓冲液： TE pH 7.4 10mmol/LTris·Cl (pH7.4) 1mmol/L EDTA(pH8.0) pH 7.6 10mmol/LTris·Cl (pH7.6) 1mmol/L EDTA(pH8.0) pH 8.0 10mmol/LTris·Cl (pH8.0) 1mmol/L EDTA(pH8.0) STE(亦称 TEN) 0.1mmol/L NaCl 10mmol/LTris·Cl (pH8.0) 1mmol/L EDTA(pH8.0) STE液（另一种配方） ??? Tris-HCI 10mM PH8.0 ??? NaCl 10mM ??? EDTA 10mM PH8.0 STET 0.1mmol/L NaCl 10mmol/LTris·Cl (pH8.0) 1mmol/L EDTA(pH8.0) 5%Triton X-100 TNT 10mmol/LTris·Cl (pH8.0) 150mmol/L NaCl 0.05% Tween 20 电泳缓冲液 Tris-乙酸（TAE）：50×浓贮存液（每升）：242g Tris 碱 57.1ml 冰乙酸 100ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) 使用时再稀释50倍。 Tris-磷酸（TPE）：10×浓贮存液（每升）：108g Tris 碱 15.5ml 85％磷酸（1.679g /ml） 40ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) 使用时再稀释10倍。 Tris-硼酸（TBE）：5×浓贮存液（每升）：54g Tris 碱 27.5g 硼酸20ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) 使用时再稀释10倍。 碱性缓冲液：1×使用液（每升）：5ml10mol/L NaOH 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) Tris-甘氨酸：5×浓贮存液（每升）：15.1g Tris 碱 94g 甘氨酸（电泳级）（pH8.3） 50ml 10%SDS（电泳级） 2×SDS 凝胶加样缓冲液 100mmol/L Tris·HCl(pH6.8) 200mmol/L 二硫苏糖醇（DTT） 4%SDS（电泳级） 0.2％溴酚蓝 20％甘油 30％丙烯酰胺： 将29g 丙烯酰胺和1gN,N’－亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中，加热至37溶解之，补加 水至终体积为100ml。用Nalgene滤器(0.45孔径)过滤除菌查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中 保存于室温。 10mol/L 乙酸铵： 把770g 乙酸铵溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。 1mol/LCaCl2： 在200ml纯水中（Milli-Q水或相当级别的水）溶解54gCaCl2·6H2O，用0.22滤器过滤除菌，分装成10ml小份