课内生物技术大实验(研究生).docVIP

《生物技术类大实验》实验指导书 2009年9月1日 前 言 《生物技术大实验》是为生物技术专业本科高年级学生开设的综合实验课程，是在普通生物学实验、生物化学实验、微生物实验、细胞生物学和遗传学实验的基础上的综合实验课程。该实验课程偏重于分子生物学实验教学，通过此实验课程，学生不仅学习到最基本的分子生物学技术，而且学习到前沿的生物技术。 分子生物学实验技术突飞猛进，日新月异。分子生物学技术的广泛应用，在20世纪下半叶对生命科学的进步产生了举世公认的巨大推动作用，而且对人们的生活和整个社会的发展亦产生了巨大的冲击和影响。分子生物学技术已广泛渗透和应用到生物学、遗传学、细胞学、微生物学、进化学、肿瘤学、免疫学、药理学、发育学、病毒学、神经生物学、生药学、法医学等与基础医学和临床医学有关的研究领域。21世纪将更是分子生物学技术快速发展的时期，由此引起的生物技术革命并将更加深刻地影响社会的发展。 学生基本技能和动手能力的培养都离不开实验室，离不开实验课上的训练，很多理论上的原理都需要到实验课上去验证，很多理论上的知识都需要到实验课上去实践。而实验课教材或实验指导书是开好实验课的基本条件之一。虽然目前的分子生物学实验教材版本众多，但针对本科生的生物技术大实验教材尚无出版。为了加强本学科的教材建设，促进本学科实验课的开设，我们参考了国内外最新的有关分子生物学实验技术的专著，根据我校学生的特点及我们自己现有的基础和条件，特选择了部分实验内容，并结合我们的经验与体会，汇编成了生物技术大实验实验指导书，以供参考。在使用过程中，可根据不同的层次适当增减。同时，对于新近产生和应用前景广阔的生物芯片技术、RNAi技术和蛋白质组研究等，限于我们目前的条件，只能作些演示或作为动态给以介绍，条件一经成熟，即行开设。 由于分子生物学技术和生物技术的快速发展，加之我们是第一次这样系统地给学生开设生物技术大试验课程，许多工作还处于不断探索的过程中，难免有不妥和疏漏之处，恳切期望读者提出宝贵意见，以利不断修正完善。 目 录 注意：值日生的任务是协助实验准备及实验室卫生清扫，具体工作时间和任务由负责研究生安排（平时可能要做一些实验准备，如预实验、配液等。要求必须提前30分钟到实验室），老师监督并作为平时成绩考核。时间安排，每次课6-8学时，周三8：50-15：50；周四8：50-13：50，周六8：50-16：50；周日8：50-16：50；有些实验时间可能增加，视实验任务而定。无特别安排暂定周六1班和周日2班，有变动商议后提前告知。 实验1、从动物组织中提取基因组DNA（刘小龙，徐鹏如）【值日生：06-1班 蔡晗、陈作深、陈顺艳、邓大标；06-2班 戴殷、邓科源、邓修康、高甘梅】 实验2、PCR扩增基因特异片段（刘小龙，徐鹏如）【值日生：06-1班蔡晗、陈作深、陈顺艳、邓大标；06-2班戴殷、邓科源、邓修康、高甘梅】 实验3、DNA片段的回收及纯化（何伟璇，熊接华）【06-1班 冯剑平、甘燕贞、霍嘉玲、李鉴清；06-2班 邓勇、黄晓灵、贾小艳、李慧莹】 实验4、PCR产物的TA克隆（何伟璇，熊接华）【06-1班 冯剑平、甘燕贞、霍嘉玲、李鉴清；06-2班 邓勇、黄晓灵、贾小艳、李慧莹】 实验5、感受态大肠杆菌细胞的制备（CaCL2法）与质粒转化（王瑞晓，汪元梅）【06-1班 李宝红、李仕勇、林世亮、刘成模；06-2班 胡博、李丽坤、李晓鹏、李雯榕】 实验6、PCR法快速鉴定重组载体（菌落鉴定）（王瑞晓，汪元梅）【06-1班 李宝红、李仕勇、林世亮、刘成模；06-2班 胡博、李丽坤、李晓鹏、李雯榕】 实验7、质粒的提取和纯化（蔡伟光，肖敏）【06-1班 刘青、罗龙清、罗月明、王光真；06-2班李炫、梁惠娟、梁礼健、梁勇】 实验8、质粒DNA的电泳和纯度检测（蔡伟光，肖敏）【06-1班 刘青、罗龙清、罗月明、王光真；06-2班 李炫、梁惠娟、梁礼健、梁勇】 实验9、限制性内切酶酶切法鉴定重组质粒.（杨林，柒启恩）【06-1班 田朝阳、邬黎、王斌、王娟娟；06-2班 林鑫城、饶靖、司徒昭韵、孙文俊】 实验10、外源基因表达载体的克隆（杨林，柒启恩）【06-1班 田朝阳、邬黎、王斌、王娟娟；06-2班 林鑫城、饶靖、司徒昭韵、孙文俊】 实验11、外源基因在大肠杆菌中的表达（赵增阳，程晓）【06-1班 徐国华、徐小珊、姚光宇、余凌冰；06-2班涂子璐、徐建、许佳俊、杨志强】 实验12、目标蛋白的PAGE检测（赵增阳，程晓）【06-1班 徐国华、徐小珊、姚光宇、余凌冰；06-2班涂子璐、徐建、许佳俊、杨志强】 实验13、RNA的提取及其纯度检测（李虹仪，程晓）【06-1班 曾国章、曾秋丽、曾