实验四 提纯的蛋白酶的分子量的鉴定080616.docVIP

实验四 提纯的菠萝蛋白酶的分子量的鉴定— SDS 一?? 目的： 1 、学习和掌握电泳（ PAGE 和 SDS—PAGE ）的基本原理及电泳技术。 2 、熟练掌握 SDS—PAGE 有关试剂配制的技术。 二.原理： 电泳 的概念： 带电粒子在电场中向与其自身带相反电荷的电极移动，这种现象称为电泳 (electrophoresis ，简称 EP) 。用电泳技术分离、分析蛋白质、酶、核酸等生物大分子，有较高的分辨率，目前已成为生物科学研究中必不可少的手段之一。 影响电泳的主要因素 泳动速度是一个物理常数，可用来鉴定蛋白质、核酸等物质以及研究它们的一些性质。影响泳动速度的因子有颗粒的性质、电场强度和溶液的性质等。 （ 1 ）颗粒性质 一般说来，颗粒带净电荷量越大，或其直径越小，或其形状越接近球形，在电场中的泳动速度就快。反之，则越慢。 （ 2 ）电场强度 电场强度越高，带电颗粒的泳动速度越快。反之，则越慢。 （ 3 ） pH 值 对蛋白质而言，溶液的 pH 值离其等电点愈远，其带净电荷量就愈大，从而泳动速度就越快。反之，则越慢。 （ 4 ） 离子强度 溶液的离子强度一般在 0.02-0.2mol/kg 之间电泳较合适。若离子强度过高，则会降低颗粒的泳动度。其原因是，带电颗粒能把溶液中与其电荷相反的离子吸引在自己周围形成离子扩散层。这种静电作用的结果，导致颗粒泳动速度