生物物质分离工程考试重点.doc

题型：问答 简答 综合 内容 固液分离（沉降、离心、过滤、膜分离） 比较，适用对象 液-液传质分离（萃取、双水相、反胶束、超临界、泡沫分离） 如何减少，避免失活问题 双水相 反胶束 分离原理 适用对象 特点 细胞破碎 特点 发酵液的预处理和菌体的回收（为什么进行预处理；预处理方法；过滤器的主要特点） 3.2悬浮液的预处理（原因） 原因： 产品在培养液或菌体中浓度低 产品与许多杂质混在一起 非牛顿型流体 目的： 改变发酵液的物理性质，提高从悬浮液中分离固形物的速率，提高固液分离器的效率。 尽可能使产物转入便于后处理的某一相中（多数是液相）。 去除发酵液中部分杂质，以利于后续各步操作。 方法： 加热法：①降低粘度 ②提供能量，促进细胞聚集 ③破坏凝胶结构——利于细胞聚集 调节pH：①细胞聚集与pH值有关 ②简便，降低粘度 ③如何保持pH局部值不过高/低 凝聚：（无机类电解质或高分子物质）表面电荷的简单中和，消除双电层，产生氢键结合。 絮凝：使用絮凝剂（天然或者合成的大分子量聚电解质以及生物絮凝剂）将胶体粒子联网，絮凝剂起架桥作用。 使用惰性助滤剂：一种颗粒均匀质地坚硬不可压缩的粒状物质，用于扩大过滤表面的适用范围。 3.4过滤法（主要特点 型号） 定义：过滤是迫使液体通过固体支撑物或过滤介质，把固体截留，从而达到固液分离的目的。 常用新型过滤器： 真空过滤器： 转鼓（优点：用于大规模生物分离的主要过滤设备，可以分离较难过滤的悬浮固粒，劳动强度小；缺点：表面利用率低，洗涤效果差，滤饼卸料时易剥落；滤布更换困难，不便观察） 水平带式（优点：处理量大，操作灵活，洗涤效果好；占地面积大；缺点：有效过滤面积小，投资较高） 水平圆盘（大型化，洗涤效果好） 水平回转翻盘（大型化，适用于过滤密度大，浓度高的粗颗粒悬浮液） 压滤器（适用于固含量高难处理的细颗粒料液）：板框压滤器 加压叶滤器 气压罐式连续压滤器 带式压滤器 错流过滤：料液给过滤介质表面一个平行的大流量的冲刷，则过滤介质表面积累的滤饼就会减少到可以忽略的程度，而通过过滤介质的流速则比较小。特点：过滤收率高，滤液质量好，减少处理步骤，易扩大生产。 细胞的破碎与分离（为什么要进行细胞破碎；哪些破碎方法；包涵体的复性） 细胞破碎的方法： 固体剪切方法（珠磨）影响因素：转盘外缘速度；细胞浓度；珠粒大小；温度；流量。 液体剪切方法（压力、机械搅拌、超声波法-空化、碰撞、剪切） 干燥：空气、真空、冷冻 溶胞：物理（渗透冲击；压力释放；冻结和融化） 化学（表面活性剂；有机溶剂；调pH）生物（溶菌酶） 基因工程表达产物后处理的特殊性：高表达蛋白产物往往相互交联在一起，形成不溶性的聚集物，通常称为包涵体。 包涵体的回收应该包括四步：①包涵体的分离 ②用变性剂（尿素或盐酸胍）溶解包涵体中的蛋白 ③变性蛋白的复性和重新氧化（包括除去过剩的变性剂和还原剂） ④以一般纯化技术获取成品蛋白 离心分离（与之前过滤的区别，适用对象、方式、种类、技术经济性） 5.1离心沉降 原理：利用固液两相的相对密度差，在离心机无孔转鼓或管子中进行悬浮液的分离操作。浮力等于粘滞力，固体粒子保持匀速运动。 离心沉降设备： 瓶式离心机（实验室用） 管式离心机（适用于低浓度难分离悬浮液，例如蛋白质和微生物菌体的分离） 多室式离心机（适用于抗生素液-液萃取分离，果汁和酒类饮料的澄清） 碟片式离心机（应用最为广泛，特点为沉降距离极短，分离效果好） 人工排渣型碟片式离心机（适用于固相浓度很低的场合，小于1/100-2/100，如抗生素的提取、疫苗的生产、梭状芽孢杆菌的收集以及维生素、生物碱甾类化合物） 喷嘴排渣型碟片式离心机（适用于处理颗粒直径为0.1-100um、体积浓度小于25/100的悬浮液，如抗生素、酶、氨基酸和微生物，或单细胞蛋白质、酵母、淀粉、糖蜜） 活门排渣型碟片式离心机（适用于处理颗粒直径为0.1-500um、固液密度差大于0.01g/cm3、固相含量小于10/100的悬浮液。对一些难分离物质特别有效，如大肠杆菌之类。此设备应用范围最广。） 活门排渣型的喷嘴碟片式离心机（适用于酶制剂、疫苗和胰岛素生产中分离物的澄清，醇生产中细菌的采集以及rDNA采集和澄清。） 螺旋卸料沉降离心机（卧式较多，全速旋转、连续进料、分离和卸料的离心机，适用于胰岛素、细胞色素、胰酶的分离和淀粉精制以及废水处理） 5.2离心过滤 原理：利用离心力使料液通过过滤介质，在有孔转鼓离心机中分离悬浮液的操作，兼有离心和过滤的双重作用。 过程：滤饼形成、滤饼压缩、滤饼压干 设备：间歇式离心机在减速情况下用刮刀卸料，或停机抽出转鼓套筒或用滤布进行卸料。 连续式离心机则用活塞