发酵工程实验讲义2.docVIP

实验三 产淀粉酶培养条件的优化 一． 实验目的 掌握发酵工艺参数的单因素优化实验设计和操作方法。 二．原理 在工业化发酵生产中，培养条件的设计是十分重要的，因为培养基的成分和培养条件对菌体生长和产物浓度都有重要的影响。单因素方法的基本原理是保持培养基组分和培养条件中其余参数不变，每次只研究一个参数的不同水平对发酵过程的影响。这种策略的优点是简单易操作，结果明了而不需要统计分析。这种策略的主要缺点是：忽略了组分间的交互作用，可能会完全丢失最适宜的条件；不能考察因素的主次关系；当考察的实验因素较多时，需要大量的实验和较长的实验周期。 三．材料与仪器 1. 活材料 出发菌株。 2. 三角瓶、容量瓶、吸管、烘箱、试管架、吸耳球、称量纸、分光光度计、烧杯、恒温水浴锅、离心机、电磁炉、接种环、酒精灯、无菌操作台。 四．方法与步骤 1. 摇瓶培养基的配 1 种子培养基：蛋白胨5 g，酵母膏1 g，NCl 5 g，1 L，pH至7.0，121 ℃灭菌20 min备用。 培养基：蛋白胨 g，酵母膏 g，加蒸馏水定容至1 L，调节pH至7.0。 发酵培养基：mL，121 ℃灭菌20 min备用2. 接种 从μL菌液，转接至装有种子培养基的三角瓶中培养24小时，培养温度37 ℃，摇床转速200 rpm。24小时后以4%接种量，转接至装有发酵培养基的三角瓶中进行扩大培养24 h，培养温度37 ℃，摇床转速200 rpm 3. 离心 取发酵液1 12000 rpm离心1min，取上清。 4. 的测定 测定。 . 淀粉酶活力的测定 比色法测定淀粉酶的活力。 . 活细胞染色镜检 取细胞培养液样品，稀释适当倍数后涂片固定，以结晶紫染色剂染色，在显微镜下观察菌体形态。． 六． 本组实验中测得的淀粉酶活力，实验误差主要来源于哪些因素? 附注：本实验中，第一、二组进行碳源种类的优化，将基础发酵培养基中的淀粉分别替换为蔗糖、葡萄糖、柠檬酸和乳糖，以可溶性淀粉为对照组；第三、四组进行氮源种类的优化，将基础发酵培养基中的蛋白胨分别替换为牛肉膏、硫酸铵、豆饼粉和鱼粉，以蛋白胨为对照组；第五组进行氮源浓度的优化，将基础培养基中的蛋白胨和酵母抽提物浓度分别改为1 g/L和0.3 g/L、5 g/L和1.5 g/L、30 g/L和 9 g/L，以10 g/L蛋白胨和3 g/L酵母抽提物为对照组；第六、七组进行微量元素优化，分别在基础发酵培养基中加入CuSO4 50 μmol/L、MnCl2 100 μmol/L、ZnSO4 100 μmol/L、Fe2 SO4 3 100 μmol/L和CoSO4·7H2O 100 μmol/L，以不添加微量元素为对照组；第八、九组进行碳氮比优化，将基础培养基中的酵母提取物添加量降为1 g/L，再将淀粉和蛋白胨含量分别改为5 g/L和5 g/L、25 g/L和25 g/L、5 g/L和25 g/L、25 g/L和5 g/L，以10 g/L淀粉和10 g/L蛋白胨为对照组；第十组进行培养基初始pH值优化，分别调节培养基初始pH值为4、5、6和8，以初始培养基pH为7.0作为对照组；第十一组进行接种量优化，分别将接种量改为0.5%、2%和8%，以4%接种量