安徽农业大学生物分离复习资料.docVIP

第一章 绪论 一、生物物质：泛指自然界中由生物所产生的物质或通过人类的生产活动所产生的有生命的物质或其初级加工产物，也可指自然界中可供利用的生物性原料或废弃物。。 二、生物技术下游加工特点： 1、发酵液或培养液是产物浓度很低的水溶液 2、培养液是多组分的混合物 3、生物产品的稳定性差 4、对最终产品的质量要求很高 三、下游加工技术操作 1、发酵液预处理和固液分离： 目的：了解目标产物表达特性，通过固液分离、细胞破碎等方法处理发酵液，初步获得含有目标产物的溶液。 操作：过滤和离心，凝聚和絮凝 2、初步纯化（高通量，低选择性，低成本） 目的：提高产品浓度，以提高产品纯度为辅，去除与产品有较大差异的物质。 操作：沉淀、萃取、吸附 3、高度纯化（低通量，高选择，高成本） 目的：目标产物的精制，去除与目标产物理化性质接近的杂质 操作：层析、电泳、沉淀 4、成品加工 目的：根据商业化要求对目标产物进行加工 操作：浓缩和结晶 四、分离纯化操作原则 1、尽可能简单、低耗、高效、快速 2、分离步骤尽量少（减少损失，降低成本） 3、避免相同原理的分离技术多次重复出现 4、尽量减少新化合物进入待分离的溶液（避免化学污染和蛋白质变性） 5、合理的分离步骤次序（原则是先低选择性，后高选择性；先高通量，后低通量；先低成本，后高成本） 五、分离纯化方案评价 分析指标：有效成分含量（纯度和浓度）、纯化倍数（每步的纯度/粗提液纯度）、收得率（每步的总浓度/粗提液浓度） 一般认为，凡是在特定实验中能较快增大纯化倍数而缓慢降低收得率的方法均属于有应用价值，反之则不宜采用。 六、产品类型 1、初级代谢产物/次级2、胞内物质/胞外物质 第二章 加工过程蛋白质活性的稳定和保存 一、蛋白质链中氨基酸残基作用：1、与活性位点有关，参与催化过程或或与底物或受体的结合过程；2、氨基酸残基的准确定位对促进和维持蛋白质三级结构是非常必要的。 二、影响蛋白质稳定性的因素及对策： 1、微生物污染——过滤除菌；低温或冷冻保存；除去水分；慎用抗菌剂。 2、温度 ——低温操作，避免反复冻融。 3、pH ——PH温和，接近生理pH 4、表面活性剂——避免添加表面活性剂 5、光照/紫外/辐射——避光 6、泡沫 ——避免产生泡沫 第三章 发酵液的预处理和菌体的回收 一、预处理 1、目的：（1）改变发酵液的物理性质，提高从悬浮液中分离固形物的速率，提高固液分离器的效率。（2）尽可能地使产物转入便于后处理的某一相中（多数为液相）。（3）去除发酵液中部分杂质，以利于后续各步操作。 2、方法及作用特点：（1）加热法：加热可降低悬浮液的粘度，还可以辅助去除一些杂蛋白。（2）调节悬浮液的PH值：起聚集作用（一般用草酸或者无机酸或碱处理）（3）凝聚和絮凝：不仅能使颗粒尺寸有效增加，并且会增大颗粒的沉降和浮选速率，提高滤饼的渗透性或者在深层过滤时产生较好的颗粒保留作用。（4）使用惰性助滤剂：扩大过滤表面的适用范围（常用硅藻土、未活化的碳等）（5）加入反应剂：能与发酵液中部分杂质发生作用，从而降低过滤阻力，提高过滤效率。 二、絮凝和凝聚异同点： 相同：都显著改善固相特点，使固相易于沉积。 区别：1、凝聚添加的是电解质，凝絮添加高聚大分子量线性分子 2、机理不同。凝聚破坏颗粒电荷，使其脱稳，凝絮形成分子架桥。 3、沉淀大小不同。凝聚1mm，凝絮10mm。 三、悬浮液分离利用颗粒密度、颗粒大小、颗粒的表面性质，主要采用沉淀和离心。 四、常用新型过滤器：真空过滤器（转鼓真空过滤器、圆盘真空过滤器）压滤器（板框压滤器、加压叶滤器、气压罐式连续压滤器、带式压滤器） 第四章 细胞破碎与分离 一、细胞壁破碎计数：直接计数法和间接计数法 二、细胞破碎方法：固体剪切法，液体剪切法，超声波法，非机械法（酶法溶胞，化学法，物理法） 第五章 离心分离 一、离心分离：是利用惯性离心力和物质的沉降系数或浮力密度的不同来进行的一项分离、浓缩或提炼操作。 三、离心分离技术的优点：离心机和其他分离机械相比可得到含湿量低的固相和高纯度的液相，而且具有占地面积小、停留时间短、无需助滤剂、系统密封好、放大简单、过程连续、分离效率易于调节、处理量大等特点。 第六章 膜分离过程 一、膜分离技术是以选择性透过膜为分离介质，利用膜对混合物各组分渗透性能的差异实现分离、提纯或浓缩的新型分离技术，近似于筛选过程，故可按分离离子或分子的大小予以分离。 根据推动力本质的不同，可具体分为四类： 1、以静压力差为推动力的过程：微滤、超滤、纳滤和反渗透 2、以蒸气分压差为推动力的过程：膜蒸馏、渗透蒸发 3、以浓度差为推动力过程：渗析 4、以电位差为推动力的过程：离子交换膜电渗析（电渗析） 微滤：细菌、病