线虫RNA干扰的基因沉默【参考】.docVIP

线虫RNA干扰的基因沉默 一、实验背景及目的 RNA干扰（RNAi）是一种使基因使失活的有效方法，在线虫中，RNA干扰因为简单快速成为研究基因功能的有效手段。 秀丽线虫是一种生活在土壤中的线虫，长约1mm，直径70um，由959个细胞组成。它具有生活周期短、易培养和保存等优点。秀丽线虫具有雌雄同体和雄性个体两种性别。雌雄同体的线虫有两条X染色体和5对常染色体。其基因组大小为80Mb，包含13000个基因。 秀丽线虫在20℃时生活周期为3.5天，25℃时约为3天，15℃时约为6天。受精卵经过胚胎发生孵化出L1、L2、 L3 、L4，最后成为成熟的幼虫。当食物缺乏或群体密度过大等环境不良的条件时，L2会不进入L3而成为dauer幼虫来抵御不良环境，当环境恢复后dauer幼虫不经过L3直接进入L4。因此可以利用该特性保存线虫品系。 RNAi是一种基因knock down 技术，将体外合成的含有目的基因的dsRNA通过某种方式引入到线虫体内，导致其体内相应的目的基因mRNA降解，从而达到基因沉默的目的。通过显微注射dsRNA或者把线虫浸入到含有dsRNA的溶液中，或者用能够表达dsRNA的大肠杆菌喂食线虫，可以将dsRNA导入大肠杆菌中。在大肠杆菌HT115中，含有目的基因发夹结构的质粒，在IPTG的诱导下转录出正义和反义的RNA,两条RNA链通过退火形成dsR