第六章体外放射分析 研究生班.pptVIP

第六章 体外放射分析技术 In Vitro Radioassay §.1 放射免疫分析技术（RIA） 放射免疫分析：指以放射性核素标记的抗原作为示踪剂，以抗原和抗体的特异性、竞争性结合反应为基础，以放射性测量为定量依据，在体外实验条件下，对超微量物质进行定量检测的一种测量技术。 一定量的标记抗原与非标记抗原与有限量的特异抗体发生可逆性的竞争性结合反应，反应平衡后分离出抗原抗体复合物，通过测量放射性复合物量来计算出非标记抗原量。 一、基本原理 放射免疫分析原理示意图 二、分析过程 1、标准曲线绘制 2、待测物的浓度测定 三、放射免疫分析基本试剂与要求 1.标准品 ① 与待测物的应属于同一种物质（分子结构、构 型、抗原决定簇及亲和力等均相同，如HCG)； ② 高度纯化，不含影响分析的干扰物； ③ 定量准确。 2.标记品（*Ag） ① 高比活性和放化纯度（＞95%）； ② 与标记前的生物活性及免疫活性要一致； ③ 标记的放射性核素T1/2要适宜； ④ 稳定性高。 3. 抗体 ① 高特异性; ② 高滴度; ③ 高亲和力。 四、RIA中B与F的分离技术 双抗体法； 2. PEG沉淀法； 3. 双抗+PEG法； 4. 固相抗体包被法； 5. 其他（SPA法，活性碳吸附法， 微孔滤膜法，电泳法等）。 §.2 免疫放射分析法（IR