重组EPO研究.doc

新型促红细胞生成素研究现状 【摘　要】　促红细胞生成素(EPO) 是一种刺激骨髓造血的糖蛋白类激素,用基因工程方法生产的重组人红细胞生成素在治疗肾性贫血及其他类型的贫血等方面有很好的疗效。本文综述了近年来各种新型促红细胞生成素的研究现状及市场前景。 【关键词】　促红细胞生成素 　促红细胞生成素(Erythropoietin ,EPO) 是一种刺激骨髓造血的糖蛋白类激素,它主要来源于肾脏(少量来源于肝脏) ,由皮质管周围的间质细胞合成。在基因重组技术诞生之前, EPO 主要从贫血患者的尿和绵羊血中提取,得率非常低,且极不稳定,理化和生物学性质难以测定,亦无法大规模应用。1985 年Lin 等首先从人类基因库中分离EPO 基因,测定其核苷酸序列,并在哺乳动物细胞中获得表达。1989年美国Amgen 公司在国际上首次研制成功重组人红细胞生成素( rhEPO) ,用于治疗肾性贫血,取得了令人瞩目的疗效[1 ] 。EPO 在癌症相关性贫血(CRA)[2 ] 、自身免疫性疾病伴发性贫血[3 ] 、骨髓增生异常综合症(MDS) 、再生障碍性贫血(AA) 、单纯红细胞再生障碍性贫血( PRCA) 、慢性髓系白血病(CML) 、特发性骨髓纤维化( IMF) 、溶血性贫血、造血干细胞移植、艾滋病引起的贫血和化疗引起的贫血及用于择期手术的自身输血血液储备等方面也有一定疗效。应用EPO 可减少输血及提高病人生活质量,但因应用其治疗需大剂量频繁给药,给病人经济上及生活上带来诸多不便。目前已有不同策略用于提高EPO 的产量和内源活性以及研制其他促红细胞生成素。如EPO 融合蛋白( EPO fusion protein) 、新 红细胞生成刺激蛋白( novel erythropoiesis stimulatingprotein ,NESP) 、造血细胞磷酸酶( haematopoiesis cellphosphatase ,HCP) 抑制物、EPO 模拟肽( EPO2mimeticpeptide) 、EPO 基因治疗等。 1EPO 简介 人类EPO 含有166 个氨基酸,相对分子质量为34 400 ,有4 个糖基化位点,其中3 个N2糖基化位点(Asn24 ,38 ,83) 和1 个O 2糖基化位点(Ser126) ,并有2 个二硫键连接。其中60 %是蛋白质(单个多肽链) , 40 %为糖类。糖基化对稳定EPO 的体内活性具有重要作用,若缺乏糖链,则EPO 在体内迅速被水解而失活。天然存在的EPO 分为两种类型,α型含34 %的碳水化合物,β型含26 %的碳水化合物。两种类型在生物学特性、抗原性及临床应用效果上均相同。EPO 主要通过促进骨髓中红系祖细胞的存活、增殖和分化以调控红细胞的生成。 展望 自1989 年6 月美国FDA 批准Amgen 公司的rhEPO 上市,到2001 年Amgen 公司长效EPO(Arane2sp) 上市的10 年中,世界EPO 市场竞争非常激烈,中国国内的生物医药企业也纷纷研制开发EPO 产品。Amgen 公司的Epogen/ Procrit (α2促红细胞生成素) 已在全世界40 多个国家销售,成为有史以来各类生物技术医药产品在市场开发中最为成功的实例。其他品牌还有日本麒麟公司的利血宝( Espo) 、德国宝灵曼公司的生血素(Recormon) 。2001 年6 月底,Amgen公司的长效贫血治疗药Aranesp (darbepeotin alfa) 获得欧洲药物评审委员会批准,至此,贫血治疗药市场的竞争愈演愈烈。其后不久,Roche 公司宣布了其用于肾衰贫血治疗的NeoRecormon 的临床研究结果,称其疗效与Aranesp 相近,且可使用Reco2Pen 自行给药[19 ] 。有关统计表明,我国肾衰患者现有近100 万人,而且大多伴有肾性贫血。因而EPO 国内市场容量非常大。国产EPO 于1997 年初获得了卫生部的批准,并在当年下半年正式投产上市。国产EPO的问世打破了美、日、德等国对此产品的垄断[20 ] ,但目前国内还没有新型促红细胞生成素上市。 21 世纪是生物技术突飞猛进的年代,目前全球医药市场上将有近100 种生物工程技术的药物品种上市,总销量将超过200 亿美元。我国生物制药近年的发展势头迅猛,生物医药制品的用量在未来数年内将以超过12 %的速度增长,这一态势将有利于我国生物医药产品的开发。国内制药企业若注意研发高水平的EPO 制剂技术及开发新剂型,必将在该领域取得突破性进展。 重组人促红细胞生成素的制备与临床应用 摘要 本研究主要探讨采用中国仓鼠卵巢细胞来生产重组人促红细胞生成素rhEPO, 该类细胞株的稳定性好并且有较高的表达效率,rhEPO的理化性质和生物学特性与人尿的促红细胞生成素