14细胞活力测定概要.ppt

实验四 细胞活力测定——MTT法 培养细胞活力测定 1 细胞克隆形成率实验 单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体形成肉眼可见的克隆。克隆形成率用来表示细胞的增殖能力 克隆形成率比＝克隆形成数／接种细胞数 缺点：操作繁琐 优点：精确、可靠 2. 化学染色法 死细胞着色法（台盼蓝、氨基黑、赤藓红B）、活细胞着色法（结晶紫、亚甲基蓝、甲苯胺蓝） 台盼蓝法 活细胞不被染色，死细胞染成蓝色，用活细胞占细胞中的百分比表示细胞活力 3. 比色法——MTT、XTT、CCK8等 四唑盐（MTT）商品名为噻唑蓝 四吐盐比色法的原理：活细胞线粒体中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶于水的蓝紫色产物甲臜（formazan)，并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。二甲亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与所含的formazan量成正比。再用酶标仪测定OD值 MTT法简单快速、准确，广泛应用于新药筛选、细胞毒性试验、肿瘤放射敏感性实验等。 操作步骤 （1）单细胞悬液接种于96孔培养板；103-104细胞/孔，每孔培养基总量100-200微升（各孔保持一致），37℃、5％CO2培养箱中培养一段时间（待细胞进入指数生长期） （2）根据实验目的加入一定药物或试剂（一般倍比稀释法设计至少5个浓度梯度，每个浓度3-5个复孔），培养24、48、72h