杂交试验计划报告.docVIP

Northern 杂交试验 一 植物总RNA的提取 1）．准备工作 （1）RNase-free水的制备：用去离子水加DEPC（焦碳酸二乙酯），使其终浓度为0.01%，过夜搅拌，121℃高温灭菌30min，烘干备用。 （2）枪头及离心管：用含0.1%的DEPC的去离子水浸泡过夜，枪头盒及装离心管的容器用三氯甲烷擦拭2贬，121℃高温灭菌30min，烘干备用。 （3）研钵及其他所需玻璃器皿：在180℃烘箱中烘烤4h. （4）80%的乙醇：用RNase-free配置即可。 （5）所使用的移液枪及其他无法灭菌的仪器均使用三氯甲烷擦拭几遍。 （6）所用到的其他试剂：异丙醇和无水乙醇都应该是未开封的。 （7）其他所用到的溶液均用DEPC水配制。 主意：试验操作整个过程中都要带上口罩和手套，接触到有可能造成RNase污染的物品时要黄手套，操作尽量迅速。 2）．实验步骤 （1）将-80℃保存的拟南芥植株称量后（约200mg）迅速转移至用液氮与人的研钵中，加入液氮，不间断的研磨植物组织直至成细粉末即可。 （2）加入400微升Buffer R-I,继续研磨直至样品完全融化，并且裂解液呈透明状。 （3）见匀浆液转移至离心管中，加入150微升的Buffer R-II，漩涡振荡15 s/次，2次。 （4）12000rpm 4℃离心5min。 （5）小心吸取上清液，转移新的离心管中（切勿吸取