蛋白质一级结构测定开题报告.pptVIP

多肽链的末端分析 酶解法测定顺序：利用外肽酶（N-肽酶和C-肽酶）对蛋白质从N-端或C-端进行逐个氨基酸的水解，从氨基酸的释放顺序测定氨基酸的排列。此法在酶解时，往往在肽链的第一个氨基酸还没有释放完全时，第二个氨基酸已经开始释放，必须用氨基酸释放时间与氨基酸释放量的关系做图，才能求出氨基酸在肽链中的顺序。但有时也会出现第二个氨基酸释放速度与第一个氨基酸释放速度相同的现象，在这种情况下将不能用此法测定。 到目前为止，没有任何一种可以测定超过50个氨基酸残基的方法。而且随着肽链的延长，测定的准确性会大大的降低。因此，都是将蛋白质水解为小肽段，再测定小肽段的顺序，最后将小肽段拼接为完整的蛋白质的一级结构。 当蛋白质水解后，产生了水解位点的n+1个水解片段。提纯分离后，这些片段的位置被打乱，Sanger利用两套水解片段重叠法，最终解决了这一难题。 部分水解肽段的顺序确定 N-赖谷苏丙丙丙赖苯谷精谷胺组蛋天丝丝苏丝丙丙丝丝丝（天胺）酪半（天胺）（谷胺）蛋蛋赖丝精（天胺）亮苏赖天精半赖脯缬（天胺）苏苯缬组谷丝亮丙天缬（谷胺）丙缬半丝（谷胺）赖（天胺）缬丙半赖（天胺）甘（谷胺）苏（天胺）半酪（谷胺）丝酪丝苏蛋丝异苏天半精谷苏甘丝丝赖酪脯（天胺）半丙酪赖苏苏（谷胺）丙（天胺）赖组异异异缬丙半谷甘（天胺）脯苏缬脯缬组苯天丙丝缬-C 胰蛋白质酶水解片段