PCR技术(硕士生课程)概要.ppt

PCR技术的发明 1985年 Mullis 青年 遗传学领域 1995年诺贝尔化学奖 灵感 PCR技术的发明 1971年Korana最早提出核酸体外扩增的设想：“经过DNA变性、与合适的引物杂交、用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆tRNA基因”。 PCR的改进与完善 Mullis最初使用DNA聚合酶I的Klenow片段 不耐高温 37°C下反应 PCR技术的改进与完善 1984年Keohanog改用T4DNA聚合酶 1988年Saiki等从温泉中分离的一株嗜热杆菌（thermus aquaticus)中提取到一种耐热DNA聚合酶 Taq DNA聚合酶 耐热性 忠实性 扩增长度 平台期 PCR技术的发展 高保真PCR 长片段PCR RT－PCR 定量PCR 原位PCR ssPCR 反向PCR PCR技术的发展 武断引物PCR 多重PCR 标记PCR 重组PCR 免疫PCR PCR－ELISA ddPCR PCR 技术的应用 ?分子生物学 克隆 重组 突变体构建 突变分析 SNP 序列分析 PCR 技术的应用 ?医学研究 基因表达水平与疾病的相关性 基因变异与疾病的相关性 基因与表型的关联 基因之间的相互关系 寻找未知基因 研究基因功能 PCR技术的应用 ?临床医学 遗传学（各种遗传病） 肿瘤学（K-ras、p53、微卫星、端粒酶、p16、BCR/ABL等） 传染病学（病毒、细菌、寄生虫等） 其他 ?法医学 亲子鉴定 刑事侦破 物证 身份确认 PCR技术的发展趋势 简便 快速 封闭 集成（高通量） 定量 广泛 预测疾病（上工治未病） 指导治疗（个体化治疗） 荧光定量PCR 双杂交探针实时荧光PCR LUX Primers * * PCR技术简介 分子生物学技术的迅速发展， 为PCR技术的发现提供了坚实的 基础，同时也为这一技术的发展 和应用提供了宽广的舞台。 PCR原理示意图 PCR的扩增效率： 循环数. 扩增子数 (靶序列拷贝数) 1 2 2 4 3 8 4 16 5 32 6 64 20 1,048,576 30 1,073,741,824(10亿) 3、PCR条件的优化 模板 引物(0.2-1umol/L) 缓冲液(Tris-HCl 10mmol/L KCl 50mmol/L pH 8.3-9.3) 镁离子(0.5-5.0 mmol/L) dNTP 耐热DNA聚合酶 温度循环参数 ? 染料法 Taq man探针 分子信标