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第三章 色谱知识导论 色谱分析是从分离技术发展而成为分离-分析技术的一门综合性学科，是一种物理化学的分析方法。它是将待分析的混合各组分在两相中进行分离，然后顺序检测各组分含量的方法。 3.1色谱分析的历史、定义及分类 3.1.1历史 1906年，俄国植物学家茨维特（M. Tswett）首先提出了色谱法，茨维特经典实验如下： 通过实验，茨维特成功的分离了树叶的石油醚萃取液中的各种色素，得到了不同因素的谱带。所得的谱带中最下面的色谱带呈黄色，经分析为胡萝卜素。随后是另一黄色的叶黄素谱带，上面两层是呈棕色和黄绿色的叶绿素a、叶绿素b谱带。由于不同色谱带有不同的颜色，故此分离方法称为色谱法色层法（chromatography）。虽然后来色谱的发展不限于分离有色物质，更多用于无色物质的分离及测定，由于习惯，现在仍沿用色谱这个名称。 在茨维特经典实验里，溶于流动相(石油醚)中的样品(植物色素)各组分经过固定相 (CaCO3)时，其与固定相发生吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和等相互作用，且其作用的大小、强弱不同，导致在固定相中滞留的时间也不同，从而先后从固定相中流出，实现了不同组分的分离。当分离后的组分由流动相携带进入检测器时，就得到了一个一个的色谱峰。 茨维特经典色谱分离速度慢，分离效率低，一直没有引起足够的重视。1941年Martin和Synge把氨基酸的混合液注入到以硅胶做固定相的柱中，用氯仿做流动相，将各个氨基酸的组分分开，这才引起了化学家的重视。1944年Martin和Synge用滤纸代替硅胶，不用色谱柱，固定相是滤纸中含有水分的纤维素，流动相用有机溶剂，也成功的分离了氨基酸，从而建立了纸色谱法(paper chromatography)。1952年，Martin等又提出了给挥发性化合物的分离测定带来划时代变革的气相色谱法(gas chromatography)，因而获得了当年的诺贝尔化学奖。20世纪50年年代又出现了将固定相涂在玻璃板上的薄层色谱法（thin-layer chromatography）。现在，高效液相色谱及计算机技术的发展，使现代色谱进入了一个迅速发展的新时代-智能色谱（chromatography with artifical intelligence）。是色谱法在现代分离分析技术中占用极其重要的地位。 3.1.2色谱的定义 由茨维特经典实验可知：色谱法是一种物理的分离方法。其利用固定相与被分离的各组分产生的吸附（或分配）作用的差别，被分离的各组分在固定相中的滞留时间不同，使不同的组分按一定的先后顺序从固定相中被流动相洗脱出来，从而实现不同组分的分离，再进行定性定量分析。色谱分析操作时，不会损失混合物中的各个组分，不改变原有组分的存在形态，也不会生成新物质。 3.1.3色谱法的分类 按两相的状态可分为： 流动相 液体 气体 固定相 固体 液体 固体 液体 名称 液固色谱 液液色谱 气固色谱 气液色谱 总称 液相色谱 气相色谱 按固定相的性质可分为： 固定相性质 柱 纸 薄层板 固定相形式 填充柱 开口管柱 具有多孔和强渗透能力的滤纸或纤维素薄膜 玻璃板 在管内填充固体吸附剂 吸附在内壁的毛细管 操作方式 从柱头向柱尾连续冲洗 从滤纸中央向四周扩散 从一端向另一端扩散 名称 柱色谱 纸色谱 薄层色谱 按分离过程的物理化学原理分： 名称 吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱 凝胶色谱 原理 利用吸附剂对不同组分吸附性能的差别 利用固定液对不同组分分配性能的差别 利用离子交换剂对不同离子亲和能力的差别 利用凝胶对不同组分分子的阻滞作用的差别 平衡常数 吸附系数KA 分配系数KP 选择性系数KS 渗透系数KPF 流动相为液体 液固吸附色谱 液液分配色谱 液相离子交换色谱 液相凝胶色谱 流动相为气体 气固吸附色谱 气液分配色谱 3.2色谱图及相关术语 3.2.1色谱图 色谱图是指色谱柱流出物通过检测器系统时所产生的响应信号对时间或流动相流出体积的曲线图。 3.2.2色谱相关术语 ①基线：在实验操作条件下，只有纯流动相通过检测器时记录下的信号-时间曲线，它反应了仪器噪声随时间的变化。稳定的基线应是一直线，若是斜线则称为基线漂移，如基线上下波动则称为噪声。 ②色谱峰 色谱图中曲线突起的部分称为色谱峰，每个色谱峰代表样品中的一种组分，理想的色谱峰应为对称的正态分布曲线。 ③峰高和峰面积 峰高h：峰顶到基线的距离。 峰面积A：组分流出曲线与基线间所包围的面积。 ④峰拐点：二阶导数为零的点。 ⑤峰宽和半峰宽 峰宽Wb：R：组分从进样到出现色谱峰顶点时所需的时间。 保留体积VR：对应于保留时间