细菌鉴定流程导论.ppt

* * * * * * * * Group members: 环境微生物的检测 ——受试菌初步鉴定报告 CONTENTS 分离环境 形态及理化特征 16sRNA基因PCR结果及网上比对结果 参考文献 结论与讨论 分离环境 时间 采集地 分离基物 2015年 手指表面 生科院2019室 受试菌的采集步骤： 在酒精灯火焰旁，半开皿盖，用手指（洗手前）在平板上轻轻按一下，迅速盖上皿盖。 形态及理化特征 菌落形态 在培养基上呈黄色菌落。菌落圆形，凸起，光滑且有光泽，边缘整齐。 形态特征：菌落特征 形态及理化特征 显微特征 圆球状，无鞭毛且不可运动 形态特征 鞭毛染色 1、步骤 制片：滴菌液→倾斜玻片→室温干燥 染色：A液3-5min→水洗→B液冲残水，覆盖染色→出现明显褐色时轻轻水洗→晾干 2、结果 受试菌无鞭毛不可运动 形态及理化特征 革兰氏染色 形态特征 1、步骤 制片：载玻片：火烧去脂→水滴：小→菌：少(薄而均匀) 染色：滴加结晶紫染液初染2min→水洗→冲残水后滴加卢戈氏碘液媒染1min→水洗→吸残水后滴加95%乙醇脱色约30s→滴加沙黄染液复染1-2min→水洗→吸干水，镜检 2、结果 受试菌为革兰氏染色阳性菌 G+（金黄色葡萄球菌） 受试菌 G-（大肠杆菌） 形态及理化特征 TITLE TITEXT 枯草芽孢杆菌 淀粉水解实验 大肠杆菌 1、步骤： 固体淀粉培养基→划线接种→37℃培养24h→滴加碘液（均匀铺满平板）→观察 2、结果： 受试菌周围未出现无色透明圈 说明不能分泌胞外淀粉酶 受试菌 理化特征 形态及理化特征 变形杆菌 糖发酵实验 大肠杆菌 1、步骤 葡萄糖发酵半固体培养基（含指示剂溴甲酚紫）→穿刺接种→37℃培养24~48h→观察培养基颜色和是否产生气泡 乳糖发酵半固体培养基（含指示剂溴甲酚紫）→穿刺接种→37℃培养24~48h→观察培养基颜色和是否产生气泡 2、结果 受试菌在培养基中生长，但葡萄糖和乳糖半固体培养基均为紫色，且未裂开，说明受试菌进行葡萄糖和乳糖发酵均不产酸不产气 受试菌 理化特征 变形杆菌 大肠杆菌 受试菌 葡萄糖 乳 糖 形态及理化特征 氨苄青霉素抗性实验 1、步骤 氨苄青霉素滤纸条→垂直接种→培养→观察、测量滤纸条距菌起始位置的距离 2、结果 受试菌对青霉素敏感 理化特征 受试菌 大肠杆菌 芽孢杆菌 葡萄球菌 平板编号 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 受试菌 1 1.80 3.70（？） 3.78 2.70 2 —— 2.10 2.90 2.60 抑菌长度 （cm） 形态及理化特征 API20NE试剂条检测 1.试剂条接种和培养 a)选择菌落（先确定是否为单一纯菌株） b)向培养盒中加入少许无菌水（保持湿度） c)挑取单菌落至2mL0.85%NaCl(aq)（已灭菌）中，使菌浓度达到0.5个麦氏单位标准浊度。用同一枪头分别接种盐水菌悬液从NO3到PNPG试剂管（120μL/管）。 d)将剩余的200μL生理盐水菌悬液加至APIAUX培养基，仔细混匀，注满由GLU至PAC管（250μL/管）。 e)GLU,ADH,URE三个管用矿物油覆盖 f)将API 20E STRIP放入盒中，盖上盒盖，在30℃培养24h。 理化特征 2.试剂条的结果观察 a)培养后，将一滴NIT 1和NIT 2试剂进入到NO3中，5min后，红色表示阳性反应；阴性反应的，为排除N2的影响，加入锌粉5min，无色表示阳性反应。 b)将JAMES试剂加入TRP，立即显现粉红色为阳性反应 c)其他见实验结果判定表 形态及理化特征 API20NE试剂条检测 理化特征 （24h，30℃） （48h，30℃） 形态及理化特征 API20NE试剂条检测 理化特征 结果 API20NE 硝酸盐还原 API 20NE 产生吲哚 API 20NE 酸化葡萄糖 API 20NE 精氨酸双水介酶活 API 20NE 脲酶活 API 20NE β-葡萄糖甙酶活 API 20NE 明胶蛋白酶活 API 20NE β-半乳糖苷酶活 API 20NE 可以同化的碳源 ? 阴性 ? 阴性 ? 阴性 ? 阴性 ? 阴性 ? 阴性 ? 阳性 ? 阴性 ? 葡萄糖，麦芽糖， 苯乙酸 形态及理化特征 API20NE试剂条检测 理化特征 “0050202” 16sRNA基因PCR结果及网上比对结果 16sRNA 基因PCR结果 GCGTGCTTACCATGCAGTCGAACGATGAAGCCCAGCTTGCTGGGTGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGAGTAACCTGCCCTTAACTCTGGGATAAGCCTGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATAG