14復方新诺明中SMZ和TMP的分离与鉴定.docVIP

新乡医学院分析化学实验课教案首页 授课教师姓名及职称： 一、实验名称 复方新诺明中SMZ和TMP的分离与鉴定 二、授课对象 药学 授课形式 实验教学 三、教学目标 1．熟悉薄层板的铺制方法 2．了解薄层色谱法在复方制剂分离、鉴定中的应用 3．掌握Rf的计算方法 四、教学内容 1．薄层色谱法的分离原理 2．薄层色谱法分离、鉴定复方制剂各组分的方法 3．Rf的意义及计算方法 五、教学安排 与课时分配 1．讲解演示 min 2．学生操作 教师辅导 min 六、授课重点 1．薄层色谱法分离、鉴定复方制剂各组分的方法 2．Rf的计算方法 七、注意事项 1．点样时毛细管切勿损坏薄层表面 2．展开剂用量适当 八、授课方法 教师示范讲述，学生操作复方新诺明中SMZTMP的与目的1．熟悉薄层板的铺制方法2．了解薄层色谱法在复方制剂的分离、鉴定中的应用3．掌握Rf值及分离度的计算方法复方新诺明为复方制剂，含磺胺甲恶唑(SMZ)和甲氧苄氨嘧啶(TMP)成分，为了使SMZ和TMP分离，可使用薄层色谱法，薄层色谱法是把固定相均匀地铺在玻璃板、铝箔或塑料板上形成薄层，铺好薄层的板称为薄层板，经点样，展开与显色后，与适宜的对照物质在同一薄层板上所得的色谱斑点作比较，用于进行定性鉴别或含量测定的方法。薄层色谱法分为吸附薄层色谱法和分配薄层色谱法，本实验采用吸附薄层色谱法，固定相采用的是硅胶GF254，磺胺甲恶唑(SMZ)和甲氧苄氨嘧啶(TMP)可在硅胶GF254荧光薄层板上，用氯仿-乙醇-正庚烷(1?1?1)为展开剂，利用硅胶对SMZ及TMP具有不同的吸附能力，流动相(展开剂)对二者具有不同的溶解能力而达到混合组分的分离。利用SMZ和TMP在荧光板上产生暗斑，与同板上的对照品比较进行定性。 Rf）是薄层色谱法的定性参数，比移值是溶质移动距离与流动相移动距离之比。，L为原点至斑点中心的距离，L0为原点至溶剂前沿的距离。如果组分的Rf与对照品的Rf一致可以初步确定组分与对照品是同一化合物，仅根据一种展开剂展开后的Rf值作为定性依据是不够的，需要经过多种展开系统得到的Rf值与对照品一致时，才可基本认定该组分与对照品是同一化合物。 三、仪器与试剂玻璃板，乳钵，微量注射器(或毛细管)，紫外分析仪；磺胺甲恶唑，甲氧苄氨嘧啶，丙酮，氯仿-乙醇-正庚烷(1?1?1)，复方新诺明片剂。 1．粘合薄层板的铺制称取羧甲基纤维素钠0.75g，置于100mL水中，加热使溶解，放置1周待澄清备用。取上述CMC-Na上清液30mL(或适量)置乳钵中，取10g硅胶GF254，分别加入乳钵中，研磨均匀后，取糊状物适量放在清洁的玻璃板上，晃动或转动玻板，使其均匀地流布于整块玻璃板上而获得均匀的薄层板。将其平放晾干，再在110℃活化1小时，贮于干燥器中备用。 2供试品溶液及对照溶液的制备分别取磺胺甲恶唑0.2g、甲氧苄氨嘧啶40mg，各加丙酮10mL，振摇使溶解，作对照溶液。取本品细粉适量(0.5～0.6g，约相当于磺胺甲恶唑0.2g)，加丙酮10mL，振摇，过滤，取滤液，作为供试品溶液。 3．点样展开 在距薄层板底边1.5cm处，用铅笔轻轻划一起始线。用微量注射器(或毛细管)分别点SMZ、TMP对照液及样品液各5μL，斑点直径不超过2~3mm。待溶剂挥散后，将薄层板置于盛有30mL展开剂的色谱缸中饱和15分钟，再将点有样品的一端浸入展开剂[氯仿-乙醇-正庚烷(1?1?1)]约0.3~0.5cm，展开。待展开剂移行约12cm，取出薄板，立即用铅笔划出溶剂前沿，待展开剂挥散后，在紫外分析仪(254nm或365nm)下观察，标出各斑点的位置、外形，计算Rf值。 注意事项 1．点样时微量注射器针头切勿损坏薄层表面。 2．色谱缸必须密闭，否则溶剂挥发，改变展开剂比例，影响分离效果。 3．展开剂用量不宜过多，否则溶剂移行速度快，分离效果受影响，但也不可过少，以免分析时间过长。一般只需满足薄层板浸入0.3~0.5cm的用量即可。 思考题 1．为什么薄层荧光被掩盖的板不能使用? 2．荧光薄层检测斑点的原理是什么? 3．色谱缸(槽)若不预先用展开剂蒸气饱和，对实验有什么影响?