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羔羊卵母细胞体外胚胎生产影响因素分析 　　摘要：利用幼畜胚胎体外生产与胚胎移植（Juvenile in vitro embryo transfer，JIVET）技术能够获得大量卵母细胞，缩短世代间隔，加快育种进程。但幼畜卵母细胞形态及代谢与成年动物存在差异，这导致幼畜胚胎发育能力低。目前，对JIVET技术的研究主要是通过改进激素处理方案及体外培养条件来增加卵母细胞数量并增强卵母细胞发育能力。从供体羔羊的选择、激素处理和卵母细胞的发育等方面对该技术进行了分析。 　　关键词：幼畜胚胎体外生产与胚胎移植（Juvenile in vitro embryo transfer，JIVET）技术；羔羊；卵母细胞 　　中图分类号：S826；S814.6 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）19-4726-04 　　幼畜胚胎体外生产与胚胎移植（Juvenile in vitro embryo transfer，JIVET）技术是集幼畜超数排卵、卵母细胞的体外成熟和体外受精、胚胎体外培养和胚胎移植为一体的高新技术体系。利用JIVET技术能够获得大量卵母细胞，缩短优良母畜繁殖的世代间隔，加快品种培育的进程[1]。与传统的绵羊超数排卵和胚胎移植（MOET）方案相比，由于生产体外胚胎的卵母细胞供体母畜的年龄提前到8～12周龄，故生产后代羔羊的世代间隔缩短为6个月，同时还大大增加了后代数量，繁殖效率成倍提高。此外，JIVET技术结合性控精液进行后代生产，也能提高基因遗传率约5%，这为该技术的商业化应用提供了非常广阔的应用前景。 　　JIVET技术应用的原理在于羔羊出生后的前2个月卵巢生长较快，卵巢的质量在4周龄和8周龄时分别增加了6.8倍和10.8倍，生长卵泡数量在4周龄时显著增加[2]。生长卵泡数量和卵巢的质量在8～12周龄时下降，一直持续到33周龄[2]。卵泡在4周龄时出现闭锁信号，在8～10周龄时达到最大值[3]。这些结果显示3～8周龄时卵泡生长旺盛，能搜集到大量的未闭锁卵母细胞。研究表明，羔羊对外源促性腺激素起反应，但部分羔羊对激素不敏感[3]。与成年羊相比，羔羊胚胎体外培养时以及移植到受体后的发育能力都很低[4]，这导致胚胎移植后胎儿流产和畸形率高[5]，极大地制约了JIVET技术的商业化应用。而通过选择适当的激素处理方案和体外胚胎生产体系能显著提高3～4周龄羔羊生产后代的能力[6，7]。目前研究表明，影响JIVET效率的因素主要包括供体的选择、超排方案和卵母细胞的发育能力等[8，9]。本文就羔羊JIVET技术的影响因素进行系统分析。 　　1 供体羔羊的选择 　　理想的供体羔羊在激素处理后将产生大量的卵泡和高发育能力的卵母细胞。影响供体羔羊选择的因素包括遗传背景、年龄等。 　　1.1 遗传背景 　　羔羊遗传背景主要包括品种、基因型和个体差异等。国内外研究结果表明，成年后排卵数高的绵羊品种性成熟前卵巢和卵泡发育滞后于成年后排卵数低的品种，且前者对激素的敏感性低于后者[10，11]。Sonjaya等[12]对刚出生的羔羊卵巢进行组织切片观察，发现法兰西（成年后排卵数低）各级卵泡数比罗姆尼（成年后排卵数高）多，且前者各级卵泡直径大于后者。4周龄时，法兰西3级卵泡数量多于罗姆尼，且前者直径大于后者。外源激素分别处理4周龄羔羊，能够诱导法兰西羔羊排卵，而罗姆尼不反应。白佳桦[10]用相同激素处理方法处理几个品种的羔羊，平均每只羔羊采集到的卵母细胞数排卵数高的品种显著低于排卵数低的品种。多胎基因FecB能够影响羔羊卵泡发育，3月龄不携带FecB基因的布鲁拉羊（Booroola）比携带FecB基因的布鲁拉羊拥有更多的大卵泡[11]。Ptak等[13]发现一只羔羊卵母细胞具有很高的发育能力，其生产的5只同胞羔羊的卵母细胞同样具有很高的发育能力，这说明基因型一致的羔羊卵母细胞发育能力也趋于一致。 　　1.2 供体年龄 　　不同年龄段羔羊激素处理后卵巢反应不同。Armstrong[14]认为激素处理羔羊的最佳年龄为4～6周龄，因为此时大部分卵泡处于应答状态。O’Brien等[15]指出，3～6周龄羔羊卵母细胞超排效果好于16～24周龄羔羊。Morton等[6]用激素处理不同年龄（3～4周龄和6～7周龄）羔羊，发现羔羊年龄影响到子宫质量，但对卵巢质量、卵泡数量和获得的卵母细胞数量没有影响。然而，6～7周龄羔羊卵母细胞囊胚率（27.9%）高于3～4周龄羔羊（20.4%），证明羔羊随着年龄的增长其卵母细胞发育能力增强。尽管如此，年轻的羔羊（4～6周龄）激素处理效果和最终获得的后代数显著高于年长的羔羊。 　　2 激素诱导应答 　　幼畜对激素的应答个体差异很大[5，13]。Ptak等[13]发现50%～72%的2～7月龄羔羊对激素