苗药八爪金龙中生物活性成分的研究（Ⅰ）.docVIP

苗药八爪金龙中生物活性成分的研究（Ⅰ） 　　摘要：采用水蒸气蒸馏法、索氏提取法分别提取苗药八爪金龙（Ardisia crispa（Thunb.）DC.）中的挥发油和岩白菜素。利用GC/MS法及HPLC/MS法对挥发油及岩白菜素含量进行测定。结果表明，岩白菜素在30.300～912.000 ng/mL范围内与峰面积具有良好的线性关系（r=0.999 1）， 平均回收率为97.66%（RSD=2.31%）；八爪金龙挥发油主要成分有己醛、（Z）-2-庚烯醛、3-羟基-1-辛烯、石竹烯、龙脑、9，12，15-十八三烯、3-苯基-2-丙烯醛、芳姜黄酮、n-癸酸、十二烷酸、正丁烯基苯酞、棕榈酸等，含量分别为7.72%、1.82%、1.92%、1.85%、2.48%、2.98%、3.06%、5.17%、4.08%、7.36%、3.11%、29.11%。GC/MS法测定出挥发油中的27个成分，占挥发油总量的87.17%。建立的HPLC/MS方法简单、准确、重复性好， 可作为八爪金龙根药材质量检测的方法。 　　关键词：八爪金龙（Ardisia crispa（Thunb.）DC.）；岩白菜素；挥发油；HPLC/MS；GC/MS 　　中图分类号：R284.1 文献标识码： A 文章编号：0439-8114（2013）19-4723-03 　　八爪金龙（Ardisia crispa（Thunb.）DC.）为金牛科紫金牛属植物，以根及叶入药，夏、秋采集，别名朱砂根、百两金、八爪龙、八爪根、铁雨伞、高八爪、开喉箭[1-3]。根木质，细长柱状，有分枝，淡紫棕色，断面淡红色，有褐色小点，具有清咽利喉、散瘀消肿等功效[2-3]。主要用于治疗咽喉肿痛、跌打损伤、风湿骨痛[4-5]。初步研究表明，八爪金龙中含有三萜皂苷、香豆素类、挥发油、酚类、醌类、强心苷、氨基酸、糖类等多种化合物[5-8]。以上有效成分除能够止咳平喘、抗炎抗菌外，还具有抗肿瘤活性、抗生育、抑制血小板凝聚、降低血压、收缩子宫、抑制cAMP磷酸二酯酶等多方面作用，因此八爪金龙具有多种生理活性，对于治疗多种疾病具有良好的开发利用价值[9，10]。但目前主要集中于异香豆素中岩白菜素的研究，且不同产地的测定方法也不尽相同。 　　本研究采用水蒸气蒸馏法提取苗药八爪金龙的挥发油成分，索氏提取法提取岩白菜素，利用GC/MS法对挥发油成分进行分离鉴定，HPLC/MS法对岩白菜素进行含量测定，以期为八爪金龙的质量控制及二次开发利用提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　采用水蒸气蒸馏法，取100 g八爪金龙根粉末，浸泡1 h，用挥发油提取器进行提取，提取完毕后收集挥发油并称重。挥发油为淡黄色，具有特殊香味，平均收率为0.20 mL/100 g。 　　1.4 岩白菜素溶液的制备及测定 　　准确称取八爪金龙根粗粉0.5 g，加入无水乙醇-氨水（V/V，3∶2）1 mL，放置0.5 h后加入25 mL氯仿，用索氏提取器提取，约70 ℃回流提取2 h，冷却，滤过，挥干溶剂，残渣用甲醇适量溶解，用0.45 μm微孔滤膜过滤至10 mL 量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀。提取液定容至50 mL，经0.45 μm微孔滤膜过滤，在“1.2.3”的条件下分析岩白菜素含量。 　　准确称取岩白菜素对照品20 mg（标准品岩白菜素），用甲醇稀释至25 mL，取此溶液1 mL稀释定容至50 mL，终浓度为0.016 mg/mL，摇匀备用。 　　1.5 标准曲线的绘制 　　准确吸取适量储备液于l、2、3、4、5号50 mL容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，分别进样，采用高效液相色谱法测定。以峰面积（Y）为纵坐标，岩白菜素的进样量（X）为横坐标绘制标准工作曲线。 　　2 结果与分析 　　2.1 试验方法验证 　　准确吸取5号容量瓶中八爪金龙根供试溶液10 μL，分别进样6次，测得岩白菜素含量平均为0.582%，RSD=0.18%，表明该试验方法精密度良好。 　　取1号容量瓶中样品2～5 mL共 6 份，制备成供试溶液，分别进样。测得各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积，RSD5%。表明其重复性较好。 　　取1号容量瓶中样品2～5 mL制备成供试溶液，分别在12 h内不同时间段进样，检测指纹图谱，测得各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积，RSD均小于3%。表明供试溶液在12 h内稳定。 　　准确称取已测定含量的八爪金龙根粉末样品5份，每份0.5 g，分别准确加入适量岩白菜素对照品溶液，按“1.4”制备供试溶液，在“1.2.3”条件下进行分析，计算回收率。岩白菜素的平均回收率为97.66%，RSD=2.31%（n=5），表明回收率较好。 　　2.2 液相色谱线性关系 　　采用高效液相色谱法测定八爪金龙中岩白菜素的含量（图1）