多氯聯苯对非洲爪蟾变态发育的影响研究.docVIP

多氯联苯对非洲爪蟾变态发育的影响研究* 周景明1，秦占芬2，徐晓白2 (1.郑州大学生物工程系，河南郑州 450001；2.中国科学院生态环境研究中心，北京 100085)? 摘　要：将非洲爪蟾蝌蚪从发育的第52期开始暴露在不同浓度(0、10、25、50、100 μg/L)的多氯联苯(Aroclor1254)中，直到变态结束，研究其对非洲爪蟾变态发育的影响。结果表明，在变态高峰期前，对照组和试验组的存活率无显著的差别，而在变态高峰期，浓度高于10 μg/L的试验组蝌蚪大量死亡，各组存活率分别为25 μg/L组72.9%,50 μg/L组53.1%,100 μg/L组12.3%；各浓度组蝌蚪在变态结束时的体重无显著差异(P0.05)；50 μg/L组和100 μg/L组蝌蚪变态高峰期所需的时间与对照组相比差异显著(P0.05)；25 μg/L以上浓度组，蝌蚪甲状腺组织表现不同程度的滤泡扩张，滤泡上皮细胞增生、叠加，滤泡数目增多等。提示多氯联苯可干扰非洲爪蟾的变态发育，两栖类变态试验可以作为筛选甲状腺激素干扰物的一种简便可行的方法。 关键词：多氯联苯；非洲爪蟾；变态；内分泌干扰物；甲状腺激素干扰物? 多氯联苯 (polychlorinated biphenyls，PCBs)是一类在联苯环上有不同氯原子取代的芳香族化合物的总称。由于PCBs的稳定的理化性质，曾被广泛用作工业电器设备的绝缘油，也用作热交换油、真空泵油、除尘剂、无碳复写纸和增塑剂等[1]。PCBs作为一种普遍存在的环境持久性有机污染物，具有广泛的内分泌干扰作用，既可干扰雌激素，又可干扰甲状腺激素的功能[23]。文献报道PCBs对甲状腺素的干扰作用比其对雌激素的干扰作用要强的多，几乎所有的PCBs混合物和同类物都可干扰甲状腺激素的自身稳态[4]，故PCBs是一种重要的甲状腺素干扰物。但大部分报道都来自实验动物(大鼠、小鼠、狨猴等)单剂量短期暴露PCBs同类物或混合物的结果[3]。近20年来，世界范围内两栖动物的种类和种群数目减少而畸形青蛙大量增加，包括PCBs在内的工农业化学污染物被怀疑为可疑的原因之一[5]，但有关PCBs对两栖动物影响的研究少有报道[69]。 两栖动物生活周期比较复杂，幼体生长速度快，在食物链中具有水陆两栖的独特地位，卵、鳃和皮肤具有渗透性，能对污染物富积和放大，从而成为环境污染的前哨物种。非洲爪蟾作为重要的模式生物，近年来在环境毒理学中得到越来越多的应用，其变态发育大体可以分为3个时期，即变态早期(premetamorphosis)包括第1期至第53期，变态前期(prometamorphosis)包括第54期至第57期，变态的高峰期(metamorphic climax)包括第58期至第66期。本试验采纳了美国内分泌干扰物筛选与检测顾问委员会(EDSTAC)对于两栖动物变态试验修订草案的建议，将爪蟾蝌蚪从第52期开始暴露不同浓度的多氯联苯(Aroclor1254)到变态结束，研究对非洲爪蟾变态发育的影响，同时也为非洲爪蟾在筛选和确证甲状腺素干扰物中的应用探索一些可行的检测终点。 1 1.1　实验动物 成年非洲爪蟾，雌雄各半，购自中国科学院发育与遗传研究所。 1.2 体视显微镜、生物显微镜和Aroclor1254购自美国Supelco公司，绒毛膜促性腺激素(hCG)购自上海第一生化药业有限公司。 1.3 在室温20 左右时，晚上给雌、雄爪蟾腹腔内分别注射hCG(雄蛙500 IU，雌蛙1 000 IU)。注射后置于盛有FETAX溶液的桶中(FETAX溶液的配制参见文献[10]，距桶底15 cm处放置一个孔径合适的网筛，约2 h后雌雄合抱，次日早晨开始产卵。排卵结束后，自然孵化，4 d后投喂刚孵出的卤虫，每3 d换水1次。 1.4 随机挑选发育到第52期的正常蝌蚪(日龄大约为21 d，此期蝌蚪前肢芽呈不规则圆锥形，后肢芽开始出现髁部缢痕及平行足)进行暴露试验，试验共分为5组，分别为对照组、10 μg/L组、25 μg /L组、50 μg/L组和100 μg/L组，每组30只蝌蚪，放入盛有18 L自来水的玻璃缸中，自来水经沙炭滤柱过滤、充分曝气。每组设3个重复。 1.5 每3 d换水1次，每次换水后各浓度组加入相应剂量的Aroclor1254母液，以无水乙醇作为溶剂，溶剂的含量不超过1/10 000(V/V)，混合均匀，对照组加入相应剂量的溶剂。每天观察蝌蚪的生长发育情况，移去死亡的蝌蚪并记录。每天记录达到变态高峰期，即前腿展开(第58期)的蝌蚪数，一旦变态完成即从缸中取出，拭去水分，称重，测其体长。 1.6 将刚完成变态的非洲爪蟾轻微麻醉后，针刺枕骨大孔致死，从腹中线剖开腹腔，用Bouine’s液固定24 h，然后转入7