大黃中大黄素的提取.docVIP

大黄中大黄素的提取、分离与鉴定 同组人： 石春杰 黄旭龙 陈 永 潘 洋 肖娟娟 大黄中大黄素的提取、分离与鉴定 一 实验目的 1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法 2）掌握PH梯度提取法的原理和操作 3）掌握蒽醌类化合物鉴定方法 4）了解液液萃取法分离混合物的实验方法 二 实验原理 大黄为蓼科植物，味苦，性寒，具有泻热通经等功效。其主要有效成分为大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚等蒽醌类化合物，其中大部分为结合的蒽醌，少数为游离的蒽醌。结合的蒽醌类化合物由于其苷元具有酚羟基，故呈弱酸性，能溶于水、乙醇、碳酸氢钠溶液，但有机溶剂中的溶解度很小。游离的蒽醌容易溶于氯仿、乙醚等有机溶剂而不溶于水。其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三大黄素甲醚和大黄酚的酸性最弱。根据以上的混合物的酸性差异，可用碱性强弱的不同溶液进行梯度 本实验主要用薄层层析法分离纯化大黄素，其Rf值由大到小分别为大黄酚和大黄素甲醚、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸。 大黄素：橙黄色针状结晶，mp.256—257℃（乙醇或冰醋酸），能升华，其溶解度如下：四氯化碳0.01﹪、氯仿0.07﹪、二硫化碳0.009﹪、乙醚0.14﹪、苯0.041﹪。易容于乙醇，可溶于稀氨水、碳酸钠水溶液，几乎不溶于水。 三 实验器材、 （1）药品：大黄粗粉，20％硫酸溶液、5％碳酸氢钠溶液、5％碳酸钠溶液、盐酸、丙酮、乙酸乙酯、硅胶板、石油醚、大黄素标准品等。 （2）回流装置一套、烧杯、层析槽、试管、梨形分液漏斗、水浴锅、电热套、蒸发皿、真空泵、抽滤瓶、铁架台等。 四 实验内容 （1）酸水解：用天平称取大黄粉10g,放置500ml烧杯中，加20﹪H2SO4水溶液100ml，直火加热1小时，用布氏漏斗抽滤，滤饼水洗后于70℃左右干燥。溶液沸腾是关闭电源，不沸腾再打开，注意不要烧干。大黄粉从土黄色变为黑色。 （2）总羟基蒽醌苷元的提取：滤饼经干燥后，置索氏提取器中，加入乙醚150ml，回流提取2小时，得乙醚提取液。乙醚提取液经薄层色谱检查有大黄酸、芦荟大黄素，大黄素、大黄素甲醚、大黄酚。包办为硅胶板，展开剂为石油醚（沸程为60—90℃）-乙酸乙酯（7:3），进水平或直立展开，在可见光下可看到四个斑点，Rf≈0.9的黄色斑点为大黄酚和大黄素甲醚混合物，在此条件下分不开，其余三个斑点，依Rf值由大到小分别为大黄素（橙色斑点）、芦荟大黄素（黄色斑点）、大黄酸（黄色斑点） （3）PH梯度萃取分离 ①大黄酸的分离和提纯：将上述乙醚提取液以5?%?碳酸氢钠溶液振荡提取，水层呈紫红色。分出水层，再重复提取数次，直至不显红色为止（共约60ml，分3~4次提取）。合并水层提取液，用盐酸酸化至pH3左右，即得黄色沉淀为大黄酸。 ②大黄素的分离和提纯：碳酸氢钠溶液提取后的乙醚层再以5%碳酸钠溶液振荡提取数次（共约120ml，分3~4次提取）水层呈红色，合并水层提取液，加 盐 酸 至 酸 性（pH6左右），得 黄 色 沉 淀 ，过 滤 ，用 水 洗 沉 淀 ，以 冰 冷 丙 酮 洗 ，在冰醋酸或吡啶中结晶数次，得橙色大针状结晶。经熔点测定、纸色谱或薄层色谱，与标准品对照鉴定为大黄素。 ③芦荟大黄素的分离和提纯：碳酸钠溶液提取后的乙醚层，再经0.25%?氢氧化钠溶液振荡提取数次（约100ml，分3~4次提取），水层呈红色，合并水层提取液，加盐酸至酸性（pH6左右），得橙色沉淀。过滤后用水洗沉淀，干燥后在冰醋酸或乙酸乙酯中结晶数次，得橙色长针状结晶。经熔点测定、纸色谱或薄层色谱鉴定为芦荟大黄素。 ④大黄酚和大黄素甲醚的分离和提纯：上述芦荟大黄素分离后的乙醚液用5%氢氧化钠溶液振荡提取数次，直至无色。合并深红色的水层溶液，加盐酸至酸性，得黄色沉淀。过滤，水洗，干燥后得大黄酚和大黄素甲醚混合物 五 大黄素的提取，分离流程图 流程图 大黄粗粉30克 20%硫酸150ml，加热1h，抽滤，干燥 滤饼 乙酸乙酯回流提取1h 乙酸乙酯层 5%碳酸氢钠溶液萃取 水层（紫红色） 乙酸乙酯层 5%碳酸钠 水层（红色） 乙酸乙酯层（弃掉）