分子诊断在感染性疾病中的应用【培训课件】.ppt

* * * * * * There are an estimated 350 million chronic carriers of HBV worldwide. More than 75% of these people live in the Western Pacific and Asian regions. Chronic hepatitis B infection is the ninth leading cause of death worldwide - it is estimated that up to 2 million people die each year as a result of HBV infection. Up to 25% of the 350 million carriers worldwide will die as a result of the consequences of infection, such as liver cirrhosis and liver cancer. References: The World Health Report. WHO 1998. Mast EE, Alter MJ. Epidemiology of viral hepatitis: an overview. Sem Virol 1993; 4; 273-283. Lee WM. Hepatitis B virus infection. N Engl J Med 1997; 337: 1733-1745. Boag F. Hepatitis B: heterosexual transmission and vaccination strategies. Int J STD AIDS 1991; 2: 318-324. Gust ID. Epidemiology of hepatitis B infection in the Western Pacific and South East Asia. Gut 1996; 38 (suppl 2): S18-S23. 2.HBV基因组结构 HBV DNA全长约3.2kb，为双股环状。双链长度不对称，全长的一链为负链，与病毒的mRNA互补；较短的一链为正链，其长度为负链的50%～85%。HBV负链有4个开放读码框架（即基因编码区，open reading frame, ORF）： X区：编码HbxAg 因开始鉴定时，对该基因表达产物功能不明确，而称为X区，现已了解X蛋白可调节病毒基因的转录水平。 前S区变异可能是病毒逃避宿主免疫的一种方法。 部分HBeAg阴性而抗-HBe阳性的病人，前C区发生突变，导致产生一个终止密码。 有上述1+2+3或2+3者可诊断 问：1+3能否确诊？单项3能否确诊？ HIV的基因结构与其它逆转录病毒基本相同 1. 窗口期：人体感染HIV后，一般需要2-12周，平均45天左右血液中才可检测到HIV抗体，极个别人的窗口期长达3-6个月(但这种机会万分之一都不到) 2. p24抗原是HIV的主要结构蛋白，在病毒的包装和成熟过程中起重要作用。p24蛋白的氨基酸序列在HIV各毒株之间高度保守，缺失p24会导致病毒无法正常组装。机体感染HIV后，p24抗原是最早能从血清中检出的病原学标志。通常感染后约2~3周即可检出，1~2月左右进入抗原高峰期，然后随着HIV抗体的产生形成抗原抗体复合物。由于抗体的中和作用，p24抗原浓度不断下降直至难以测出的水平时，标志着HIV感染者进入无症状期。当HIV抗原再度在血清中增长，意味着病毒的大量繁殖和免疫系统的破坏，提示感染者已经或即将进入AIDS发作期。因此，HIVp24抗原检测主要是作为HIV抗体检测窗口期的辅助诊断。 1.受检者血清HIV RNA1500 copies/ml 未发现HIV传播， HIV传播与病毒量之间有显著的剂量关系。 2. 在HIV阳性母亲产下的婴儿是否感染HIV的诊断中具有非常重要的意义。PCR可用于判定婴儿出生后18个月内，其血液中的HIV IgG抗体是否来自于母体，婴儿是否感染 HIV。前病毒DNA PCR检测法对出生48h内婴儿的检测敏感性为38%，出生14d婴儿的检测敏感性可为93%。 SARS-CoV是一种单链正义RNA病毒，由美国CDC完成测序的Urbani株全基因组长29,727bp，平均G+C含量占41%，有11个ORFs，SARS-CoV的核苷酸序列中只有24个部位存在差异。SARS-CoV基因组结构是典型的缺乏HE蛋白的冠状病毒基因组结构，具有特征的基因序列[5’-复制酶（rep）