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微生态制剂对水产动物的生物活性研究 （哈尔滨中科生物工程有限公司 赵前） 摘要：为测定微生态制剂“高免肽”对水产动物抗病、促生长功效以及生产应用价值。首选药敏试验结果表明，微生态制剂“高免肽”对大肠杆菌K99、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌最小抑菌菌浓度分别为0.78、3.12 和6.25 μg/mL。选择大黄鱼、真鲷、白鲢、草鱼、花鲢鱼和青虾为实验动物，在基础日粮中按比例0.1%添加高免肽。监测实验鱼虾成活率、日增重、饵料投入比等生产性能比较指标。结果显示，高免肽对实验鱼虾成活率平均提高10%以上，青虾养殖效果显著。 关键词：微生态、高免肽、水产动物、生物活性、生产性能 高免肽是由酵母细胞壁、生物多糖、生物抗菌肽、生物碱、苷类、蒽醌类及其还原衍生物和多种活性肽组成，具有提高免疫力、提高消化率、杀灭细菌真菌和原虫、抵制病毒侵扰等作用，是生物提高非特异性免疫的不可缺少的重要组成成分。与抗生素相比，具有高效、无耐药性、无污染、无毒副作用等优点，符合绿色环保饲料的要求，是理想的抗生素替代品。高免肽具有活性高、分子量小、热稳定性好、水溶性好和生物利用度高等特点。实验通过在饲料中添加高免肽，比较对大黄鱼、真鲷、白鲢、草鱼、花鲢鱼和青虾的日平均增重、发病率、死亡率、饵料系数等生产性能影响，为高免肽在水产养殖中的应用提供理论依据。 1 材料、方法、时间与地点 1.1 实验材料 试验用高免肽由哈尔滨中科生物工程有限公司提供，批号黑饲添字（2009）251015，阴凉、干燥处贮藏。 实验用菌株：大肠杆菌K99、金黄色葡萄球菌CowanⅠ和枯草芽孢杆菌均由国家兽用生物制品工程技术研究中心惠赠。 1.2 时间和地点 试验地点：江苏省盐城市射阳县黄沙港某养殖场。 试验时间：2011年3月25日-2011年4月24日。 1.3 高免肽最小抑菌浓度的测定 采用微量稀释法进行测定。把处于对数生长期OD600≈0.5（细菌计数约10^6）的指示菌用LB 培养液稀释到OD600≈0.05，分别接种到96 孔细胞培养板上，每孔90 μL。将高免肽用pH 值6.0 的0.1 mol/LPBS 倍比稀释。各取10 μL 分别加入培养孔中，混匀，每组重复3 个孔。设加LB 培养液为阴性对照，接种细菌的为阳性对照。置37 ℃培养箱孵育12 h后取出，用自动酶标仪测量培养液的OD600值，将完全抑制菌体生长的最低蛋白浓度确定为最小抑菌菌浓度（MIC）。 1.4 实验动物的选择与养殖 大黄鱼、真鲷采用海水网箱养殖，全冰鲜饲料喂养。实验组按每吨饲料添加高免肽1kg，饲养30 d，每天抽样检查。对照组饲喂不添加任何添加物的冰鲜饲料。 白鲢、草鱼、花鲢鱼采用池塘养殖方式，水深0.8～1.0 m，每667 m2 投入鱼苗10 万尾，基础饵料为黄豆浆，实验组按每吨饲料添加高免肽1kg，饲养25 d，每天抽样检查。对照组饲喂不添加任何药物。 青虾苗由长江直接捕捞的抱仔青虾所繁育的虾苗（长江虾苗），每池平均放养规格7 000 尾/kg，每口池放养数量约6 万尾，重量为8.6 kg。每日2 次喂料，基础饲料为：豆粉、鱼粉、皮糠、次粉、贝壳粉、矿物质、螺旋藻混合物。实验组添加抗菌肽，按每吨饲料添加抗菌肽1kg。对照组饲喂不添加任何添加物的基础饲料。 1.5 饲养管理 坚持每天2 次巡池，检查实验鱼虾摄食情况，及时调整日投饵量，严格检查排水过滤设施是否破损，及时捞出残饵杂物、多余水草，捕捉蛙、蛇等敌害生物。保证微流水的畅通、有充足的氧气。定期使用生石灰进行全池泼洒消毒，生石灰用量为每口池 每次7.5 kg。 1.6 生产性能指标测定 每天采集数据至实验结束，统计成活率、亩平均产量、平均个体重，计算饵料报酬等，并对发病率进行λ2卡方显著性分析。 2 结果 2.1 高免肽的最小抑菌浓度 通过微量稀释法测得高免肽对大肠杆菌K99、金黄色葡萄球菌CowanⅠ和枯草芽孢杆菌的MIC 分别为0.78、3.12 和6.25 μg/mL。 2.2 大黄鱼和真鲷养殖结果 饲养30 d，高免肽实验组鱼苗色泽鲜艳，大小均一。大黄鱼实验组的发病率为15.1%，对照组为26.3%，下降了11.2%。真鲷实验组的发病率为17.6%，对照组为20.4%，下降了2.8%。可见高免肽显著或极显著降低大黄鱼和真鲷的发病率（P0.05）或（P0.01）。实验组大黄鱼的日增重比对照组高0.14 g/d，真鲷的日增重比对照组高0.17 g/d，表现出较好的生产性能（表1）。 表1 高免肽对大黄鱼、真鲷生产性能的影响 组别 日平均增重（g/d） 发病率 （%） 死亡率 （%） 饵料系数 投入产出比 大黄 鱼 实验组 1.42 15.1* 7.