实验六 PCR反应2011.pptVIP

实验六 PCR反应 一、实验目的 了解PCR的基本原理，掌握PCR的基本操作技术。 二、实验原理 PCR技术是通过模拟体内DNA复制的方式，在体外选择性地将DNA某个特殊区域扩增出来的技术。 PCR的过程： 高温变性：将反应体系置于高温下变性，使模板双链DNA解链为两条单链 低温退火：引物与模板链结合，形成部分双链DNA 中温延伸：Taq DNA聚合酶使引物从5′端向3′端延伸，4种dNTP掺入合成新的DNA互补链 反复进行这种变性、退火和聚合反应循环，可使两端引物限定范围内的DNA序列以指数形式扩增。 三、实验材料 实验二所提质粒： pET32-CaM5 四、试剂 1. 10x PCR buffer 、rTaq 酶 2. dNTP mixtures：dATP, dTTP, dGTP, dCTP 各2.5mM 3. 前向引物(10uM)： 5’-CGCGAATTCATGGCAGATCAGCTCACCGATGATC-3’ 4. 反向引物(10uM)： 5’-AGAGCGGCCGCCTTTGCCATCATAACTTTGACAAA-3’ 5. 1.0% 琼脂糖凝胶 以pET32-CaM5为模板，理论上能扩增出一条443bp的DNA条带 正向引物（Forwa