文冠果殼苷对侧脑室注射Aβ1-42致痴呆模型小鼠学习记忆障碍的改善作用.docVIP

PAGE PAGE 1文冠果壳苷对侧脑室注射Aβ1-42 致痴呆模型小鼠学习记忆障碍的改善作用邹莉波1，王立华2，迟天燕1，纪雪飞1，李伟1，李晓春1，付琪1，杨柏珍2（1.沈阳药科大学生命科学与生物制药学院，沈阳110016；2.中科院沈阳生态研究所，沈阳110016）摘 要目的：本论文以侧脑室注射Aβ1-42 致痴呆小鼠为模型，考察了文冠果壳苷对痴呆模型小鼠学习记忆障碍的改善作用，并从抗氧化损伤角度探讨了文冠果壳苷对抗Aβ1-42 致痴呆作用的机制。方法：采用小鼠新物体辨别、水迷宫、避暗等行为学测试方法研究文冠果壳苷改善学习记忆障碍的作用，用生化学方法检测脑组织总抗氧化能力（T-AOC）、GSH/GSSG比值、MDA含量及CAT活性。结果：文冠果壳苷( 0.08 ~ 0.32mg/kg ) 显著延长新物体辨别实验中对新物体探索时间并提高优先指数；显著缩短水迷宫试验中小鼠到达安全台的时间；显著减少避暗实验中的错误次数，延长潜伏期，缩短总电击时间。生化检测结果表明，文冠果壳苷显著提高模型小鼠大脑组织中CAT活性及T-AOC，减少MDA含量、增加GSH含量并提高GSH/GSSG比值。结论：综上所述，文冠果壳苷能显著改善侧脑室注射Aβ1-42 致痴呆模型小鼠的学习记忆障碍，其作用机制可能与对抗自由基损伤、抑制脂质过氧化反应等有关。关键词：文冠果壳苷；Aβ1-42；阿尔茨海默病；抗氧化阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）的发病机制复杂，涉及多种神经系统功能障碍[1]，而现有的治疗药物绝大多数作用机制比较单一，如AChE抑制剂等，临床疗效有限，因此，寻找具有综合治疗作用的抗痴呆新药仍是当今医药界有待攻破的一大难题。文冠果 (Xanthoceras sorbifolia Bge) 为无患子科文冠果属植物。一属一种，为我国特有种，在我国东北、华北、西北都有栽培，资源丰富。文冠果果仁与果壳产量比为10:8～10:9，果壳产量很大，因尚未被研究利用，基本上属废弃物。文冠果壳苷（Xanthoceraside）即是一种从文冠果果壳中提取的三萜皂苷类化合物。前期研究结果表明[2]，文冠果壳苷能拮抗东莨菪碱、亚硝酸钠、40% 乙醇所致的记忆获得、巩固、再现和空间辨别障碍；显著改善侧脑室注射Aβ25-35致痴呆模型小鼠的学习记忆障碍，并显著提高模型小鼠脑内的SOD及GSH-Px活性。本论文在前期工作的基础上，进一步考察文冠果壳苷对Aβ1-42致痴呆模型小鼠学习记忆障碍的改善作用及机制，为文冠果壳苷开发成治疗AD的新型药物提供依据。 1. 实验材料1.1药品与试剂文冠果壳苷 ( Xanthoceraside )：由中科院生态所提供；银杏叶片：深圳海王药业有限公司，批β–Amyloid (1-42) fragment：北京博奥森生物技术有限公司；微量丙二醛 ( MDA ) 测试盒、氧化型谷胱甘肽 ( GSSG ) 及还原型谷胱甘肽 ( GSH ) 测试盒、过氧化氢酶 ( CAT ) 测试盒、总抗氧化能力 ( T－AOC ) 测试盒，均购自南京建成生物工程研究所。1.2实验动物昆明种小白鼠，雄性，体重24-28 g，由沈阳药科大学动物中心提供，合格证号：SCXK（辽）20041.3实验仪器722S分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；UV-2000型荧光分光光度计，尤尼柯(上海) 仪器有限公司； JY92-Ⅱ超声波细胞粉碎机及DY89-Ⅱ电动玻璃匀浆机，宁波新芝生物科技有限公司；J2-HS型低温超速离心机，美国BECKMAN；行为学实验装置：小鼠避暗、水迷路、新物体辨别装置均为定制。 2. 实 验 方 法2.1 动物模型的建立[3]及实验方案取雄性昆明种小白鼠，体重25～30 g。将小鼠随机分为6组，每组10只，包括假手术组，模型组，银杏叶片31.2 mg/kg组，文冠果壳苷0.08、0.16、0.32 mg/kg组。将小鼠用3.5%的水合氯醛( 10 ml/kg )麻醉后，参考文献[3，4] 方法，除对照组外，每组小鼠均侧脑室一次性注入5μL凝聚态Aβ1-42（含Aβ1-42 410 pmol，以无菌生理盐水溶解，37℃ 120 h使其成凝聚态），留针1min，对照组小鼠同法侧脑室给与等体积溶剂（1／135的DMSO生理盐水）。造模即日起开始给药，至行为学测试结束。给药后第8-9天进行新物体辨别实验，第10-14天进行水迷宫实验，第15-16天进行避暗实验，末次给药后，断头取脑匀浆，测定2.2 新物体辨别实验参照文献[4]进行。用测试期对新物体的优先指数来反应小鼠的记忆能力。新物体优先指数是探索新物体的时间占测试期探索总时间的百分比。2.3 小鼠水迷宫法参照文献[5进行。每只小鼠每天训练10次，间隔