生物传感器大肠杆菌砷探测器制作工艺摘要.ppt

生物技术1302 梁竟一 微生物传感 大肠杆菌 砷探测器 微生物研讨 原理回顾 砷探测器的设计原理 设计原理：大肠杆菌砷探测器 大肠杆菌的质粒R773中有一个抗砷操纵子,编码了两个阻遏蛋白质ArsR和ArsD,分别对低和高浓度砷或亚砷酸盐敏感。该基因线路利用了这两个蛋白质,用ArsR和ArsD分别控制基因和lacZ基因的表达,而λcI和lacZ基因一起控制尿素酶基因的表达。 原理回顾 大肠杆菌砷探测器作用机制 中性 在有低浓砷或亚砷酸盐时(约5PPb),其与ArsR结合形成复合体从而解除了对I基因的阻遏,表达生成的几Cl又阻遏了尿素酶基因的表达,使培养液呈中性。 酸性 当有高浓度砷或亚砷酸盐时(约20ppb),其与ArsD结合从而解除了对lacZ基因的抑制,表达生成的半乳糖昔酶催化半乳糖降解使之生成乙酸和乳酸,使培养液呈酸性,pH值可达5以下。 碱性 在没有砷(亚砷)酸盐时,λcI基因不表达,通过加人异乳糖解除lacI的阻遏后尿素酶基因表达,催化底物尿素产生氨使培养液呈碱性(pH值达到9以上)。 第一部分 样液的培育 1）使用细胞工程，培养大肠杆菌，使用细胞工程,培养大肠杆菌,从大肠杆菌的细胞质中提取质粒R773,质粒为环状.。 2）选取大肠杆菌质粒R773，同时用ArsD和ArsR对λcI和LacZ进行编码。 3）编辑好之后将质粒送回大肠杆菌:：在大肠杆菌的培养液