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杜仲叶中绿原酸醇提法的工艺研究 摘要：研究以乙醇为溶剂提取杜仲叶中绿原酸的最佳工艺条件。通过单因素实验研究各因素对提取率的影响，应用正交实验优化工艺条件。乙醇提取杜仲叶绿原酸最佳工艺条件为：乙醇浓度为60％，浸提温度为60℃ ，时间为2.5 h，物料比1：12。在最佳条件下，绿原酸提取率为2.434％。 关键词：绿原酸；提取；杜仲叶；乙醇 1.引言 杜仲(Eucommia ulmoides Oily．)为杜仲科(Eucom．miaceae)杜仲属植物，含有较高的绿原酸。绿原酸(chlorogenic acid)，又名3一咖啡酰奎尼酸(3一cafeoy— 图表 1 quinic acid)，是植物在有氧吸过程中经磷酸戊糖途径(HMS)的中问产物合成的一种苯丙素类物质,其结构式如图1。 绿原酸是一种具有广泛生理活性和药理活性的物质，具有利胆、抗菌、降压、增加白血球及兴奋中枢神经系统、抗肿瘤、降脂、清除自由基等多种药理作用，对消化系统、血液系统和生殖系统疾病均有显著疗效[]。此研究以乙醇、甲醇为溶剂来提取杜仲叶中的绿原酸，采用紫外可见分光光度法检测其含量，为杜仲叶中绿原酸的提取工艺产业化奠定一定的基础，为杜仲叶的开发利用开辟新的途径。 2.仪器与材料 DF一101S型集热式恒温加热磁力搅拌器(巩义市予华仪器有限责任公司)；SHZ—III型循环水真空泵(上海亚荣生化仪器厂)；SIGMAI一15K台式离心机(德国SIGMA)；UV一2550紫外可见分光光度计(日本岛津公司)；无水乙醇(分析纯，重庆川东化工有限公司)；甲醇(分析纯，天津市大茂化学试剂厂)；绿原酸标准品(宝鸡市贝斯特植物原料厂)；供试材料杜仲叶采自贵州遵义地区，经烘箱低温干燥。 3.方法 3.1杜仲叶中绿原酸含量的测定采用紫外分光光度法。[] 3.1.1波长的选择 精密称取绿原酸标准品5mg，用0.2mol/L的盐酸溶液溶解并定容至50ml的棕色容量瓶中，混匀。于500～200nm范围内扫描，以0.2 mol/L的盐酸溶液作参比，由图2可以看出，绿原酸在324nm处有最大吸收峰，在217nm处也有峰出现，考虑到紫外分光光度及检测系统在217nm附近的灵敏度不高，故选择在324nm波长处测量绿原酸的吸光度。 3.1.2标准曲线的绘制 准确吸取绿原酸标准品适量，用0.2 mol/L的盐酸溶液稀释成每毫升含绿原酸2，4，6，8，10，12，14，16，18mg的标准溶液，以0.2 mol/L的盐酸溶液作参比，在324nm处测定其吸收值，以样品的浓度C(μg/ml)为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制A-C标准曲线(图3)。 3.2提取单因素实验 准确称取5g干燥(50℃)的杜仲叶粉(20目)，置于250ml平底烧瓶中，采用不同的实验方法设计进行提取。改变提取条件以确定提取因素变化范围以及各因素的较佳值。每次提取液离心过滤，真空蒸发去除溶剂后，用0.2mol/L的盐酸溶液定容至100 ml，测定绿原酸的含量，并折算为每100g干叶中的提取率。 3.3正交实验设计 在提取单因素实验[]的基础上，采用正交实验优化工艺条件。以乙醇浓度、浸提温度、浸提时间、料液比4个因素作为考察对象，每个因素选用3个水平。选用表2，安排实验优化工艺条件。 4 结果与分析 4.1最大吸收波长的确定 如图2所示。 图表 2 4.2标准曲线和回归方程 回归方程为：A=0.05221C+0.01785 R=0.9989 因此绿原酸的提取率的计算公式如下： 绿原酸提取率(％)= ×100 n——提取液中绿原酸的浓度(g/ml)；——提取液的体积(ml)；m——杜仲叶的质量(g) 4.3浓度对提取率的影响 在提取温度40℃ ，料液比1：12，提取时间2h，乙醇、甲醇浓度对绿原酸提取率的影响见图3。 由图4可以看出，当乙醇浓度低于60％时，随着浓度的增加，绿原酸的提取率升高，在浓度为60％时其提取率最高。随后，提取率随乙醇的浓度的升高而降低。而甲醇在40％时提取率最高，随着浓度的升高提取率逐渐降低。 4.4料液比对提取率的影响 图表 3 图表 4 如图4所示，随着溶剂量的增加，乙醇、甲醇的浸提效果都随之增高。乙醇与杜仲叶的比例为1：12时，提取率到达最大值。而甲醇与杜仲叶的比例为1：14时有最大值，随后逐渐下降，因此两溶剂的最佳料液比分别采用1：12和1：14。若料液比再过大则会给后续浓缩工序造成困难，且成本增大。 4.5 pH对提取效果的影响 在固定料液比1：12，提取温