第五章 病毒答案.pptVIP

第三节 Subvirus 亚病毒 亚病毒概念 1981年法国著名病毒学家 A. Dlwoff 把病毒分为亚病毒和真病毒，亚病毒只含有核酸或蛋白质，而真病毒同时含有核酸和蛋白质。 亚病毒包括： 类病毒 Viroid 朊病毒 Prion 拟病毒 Virusoid 一、类病毒Viroid 1971年在美国工作的瑞士学者 T. O. Diener在研究马铃薯纺锤形块茎病(PSTD)时发现了类病毒。类病毒只含有侵染性RNA而没有蛋白质。 二、拟病毒(卫星病毒) Virusoid 裸露的小DNA或者RNA 卫星病毒必须依赖辅助病毒提供复制酶进行复制。 三、朊病毒Prions 朊病毒是美国 Prusiner 在研究羊搔痒病时发现痒病的病原体。朊病毒是一种对各种理化作用具有很强抵抗力，传染性甚强，分子量在27 000－30 000的侵染性蛋白质因子。 可引起人和动物的疾病有： 震颤病或库鲁病 克-雅病 Gerstrmann-Straussler 综合症 致死性家族失眠症 羊瘙痒病 牛海绵脑病，俗称疯牛病 传染性雪貂白质脑病 大耳鹿慢性消耗病 由宿主自身编码，错误折叠的蛋白 ，可以促使正常蛋白发生构象变化 早在300年前，人们已经注意到在绵羊和山羊身上患的“羊瘙痒症”。其症状表现为：丧失协调性、站立不稳、烦躁不安、奇痒难熬，直至瘫痪死亡。 20世纪60年代（1967年），英国生物学家阿尔卑斯用放射处理破坏DNA和RNA后，其组织仍具感染性，因而认为“羊瘙痒症”的致病因子并非核酸，而可能是蛋白质（当时，这一研究论文发表在Nature杂志上）。由于这种推断不符合当时的一般认识（以“核酸”为中心的观念），也缺乏有力的实验支持，因而没有得到认同，甚至被视为异端邪说。 1982年，美国神经学与生物化学家Stanley B.P Prusiner经过各种实验证实，用灭活核酸的方式无法消除“瘙痒病”的致病性，而用蛋白变性的方式却可以使致病力消失。因此，他提出了著名的“朊病毒”假说，他认为，引起羊瘙痒病、牛疯牛病的并不是核酸病毒，而是一种变构的蛋白，这种变构的蛋白可以诱导其他正常朊蛋白相继发生结构变化，变成具有致病性和传染性的“朊病毒”。 马继延认为英文中的prion被翻译成中文的朊病毒并不代表这些朊蛋白是一种病毒，仅仅代表这些变构蛋白能像病毒一样具有传染性。 Stanley B.P Prusine因为朊病毒假说的提出而获得1997年的诺贝尔奖，其后的几十年里，科学家们尝试用实验证实这一假说。 直到2003年，一个实验室将朊蛋白重组后经过诱导转变为淀粉样蛋白聚合体，在朊蛋白高表达的转基因小鼠体内复制了“疯牛病”，遗憾的是，还原疾病的潜伏期长，且不能诱发正常小鼠发病。 马继延教授注意到了一个细节，位于细胞膜上的正常朊蛋白可以被磷脂酶C (Phospholipase C)从膜上切除下来，而致病性朊蛋白却无法被切除，科学家们曾猜测，构象的改变使得朊蛋白与脂膜发生了新的相互作用，从而使磷脂酶C无法将其从膜上切除，另外一种说法认为变构的朊蛋白聚集在一起阻碍酶工作。 马继延教授猜测，也许细胞膜上的脂具有改变朊蛋白的作用，于是，他们另辟蹊径，尝试在体外诱导时加入细胞膜中的脂成分，结果成功地诱导出具有致病性和感染性的阮病毒。 第四节 病毒的培养 一、病毒的培养特征 1、液体培养：透明的 裂解溶液 2、固体培养：形成噬菌斑 二、病毒的培养基 病毒是严格专性寄生，所以必须活体培养 对培养基的要求是： 1、活的敏感动物或动物组织细胞 2、能提供病毒附着的受体。 3、敏感细胞内没有破坏病毒的特异性限制性核酸内切酶。 人胚组织细胞，组织细胞，肿瘤细胞，动物组织细胞、胚细胞，敏感动植物和细菌等。 三、病毒的培养 1、空斑实验法：单层细胞被病毒感染后，一个个细胞被病毒蚀空形成的 空斑。 2、系列稀释终点法：将病毒稀释成一系列稀释悬液，将这系列稀释液接种到含宿主细胞的培养基中，培养观察，可得到病毒的滴度和终点。 滴度：引起50%敏感动物死亡的致死剂量。 单位体积液体中有感染能力的病毒或噬菌体数目。如每微升的噬菌斑形成单位(pfu/μl) 3、噬菌体的分离培养 双层琼脂培养法。 第五节病毒对物理、化学因素的抵抗能力及在污水处理过程中的去除效果 一、病毒对物理因素的抵抗力 （一）温度 1、温度55-65度不到一小时灭活。 2、低温可以保存病毒 一般在-70度保存。 3、土壤环境可以保护病毒免受热的破坏作用。 （二）、光和其他辐射 1、紫外光 ：使核酸形成胸腺嘧啶二聚体而对病毒有灭活作用。 2、可见光：在天然水体和氧化塘中，日光对肠道病毒有灭活作用。 3、离子辐射 X Y等射线。 （三）、干燥 干燥有利于病毒的生存。 二、