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免疫学实验 白细胞计数及白细胞分类 实验一 白细胞计数方法 原理：用稀乙酸将血液稀释２０倍，使红细胞全部溶解，滴入白细胞计数池中，在显微镜下计数，求得每立方毫米血液或每升中的白细胞数。 血细胞计数板 通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，每个大方格面积为1mm2，四角上的大方格用于计算白细胞，中央大方格用于红细胞计数，被双线等分成25个中方格，每个中方格又划分为16个小方格。计数板与盖玻片组成计数池，计数池深度为0.1mm。 血细胞计数板 方法 1、加白细胞稀释液0.38ml于一小试管中。 2、用75%酒精棉球消毒指端，等干，针刺皮肤深约2～3mm，出现绿豆大小血滴，微量吸管取血20ul。 3、擦去微量吸管外余血，将其插入稀释液底部，轻轻将血放出，并吸取上清液洗涤微量吸管3次，混匀。 4、擦净计数板和盖玻片，将盖玻片平放在计数板上 。 方法 5、重新摇匀白细胞混悬液，用吸管取该液一滴，使之接触盖玻片边缘和计数板空隙处，悬液即藉毛细管作用自然引入，充满计数室，静置2-3min，使白细胞下沉。 6、低倍镜计数四角4个大方格内白细胞总数。 7、结果计算：χ/4×10×20×106/L=白细胞/L（或者χ×50 =白细胞/mm3） 注意 不能在水肿、炎症部位采血。 采血时不能挤压过度，因此针刺深度必须适当。 在大方格内压线细胞应按计数原则计数，即数上不数下，数左不数右。 充池前的摇匀要注意，气泡不能太多。 每个大方格内计得的白细胞数相差超过10个，表示悬液未摇匀结果不可靠。 临床意义 1、白细胞数变动大，正常成人为4～10×109/L（4000～10000/mm3）。 2、白细胞总数的增减主要受中性粒细胞数量的影响。 3、急性化脓性感染、体内组织坏死，急性失血和中毒（代谢性中毒、急性铅、汞中毒）、白血病等。病毒感染、伤寒、脾功能亢进、再生障碍性贫血以及某些药物（如氯霉素）所致的骨髓抑制，可使白细胞减少。 实验二 白细胞分类 原理：根据白细胞内颗粒对酸碱性染料的易染程度的不同而区分出不同种类的白细胞。 瑞氏染料（由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料） 方法 1、指端消毒，穿刺，出现绿豆大小血滴。 2、在载玻片的左端沾取一滴血，沾取时勿使玻片触及皮肤，把推玻片的一端放在血滴右侧，将推片略向左移触及血滴，血液即均匀附着于二片之间。 3、使推片与载玻片中间形成30度夹角，平衡地向前推进，制成血涂片后，放在空气中待其自干，切勿加热干燥。 方法 4、用玻璃蜡笔在涂片两端各划一线（从上至下），以防染液外溢。 5、加瑞氏染液，直至血片被盖满为止，计算染液滴数。 6、一分钟后，滴加等量缓冲液，同时轻轻振动血涂片，使之与染液混匀。 再染5～10分钟后，用水缓慢将染液冲去，冲洗前切勿将染液倾倒。 方法 7、空气中自然干燥后镜检，先用低倍镜观察血涂片染色是否良好，厚薄是否适宜，选择涂片的中部及细胞分布均匀处，转油镜按一定顺序检查。 中性粒细胞：细胞核淡紫红色，分2－5叶，或呈杵状。细胞浆淡红色浆，均匀布满浅紫红色细小颗粒。占有50~70%. 嗜酸性粒细胞：细胞核深紫红色，二叶核，呈眼镜样。淡红色浆，布满粗大，圆形而均匀一致红的桔红色颗粒。占有0.5~5%. 嗜碱性粒细胞：细胞核核结构不清，分叶不明显。细胞浆淡红色浆中有大小不等、分布不匀的蓝黑色颗粒，并常覆盖核上。占有0~1%. 淋巴细胞:细胞核深紫红色，圆或椭圆，染色质致密成团块样。细胞浆浆少，透明蓝色，一般无颗粒，大淋巴细胞浆较多，可含有少量淡紫红色颗粒。占有20~40%. 单核细胞：细胞核深紫红色，肾形，马蹄形或不规则形，有扭曲拆叠感，染色质呈粗网状。细胞浆浆多，淡灰蓝色，有细小紫红色颗粒，似灰尘样弥散分布于浆中。占有3~8%. 注意事项 1、血涂片的厚薄与下列因素有关：血滴大则厚，小则薄；推片与载玻片之间的角度大则厚，小则薄；推抹涂片之速度快则厚、慢则薄。 2、推片时用力要平衡，否则血膜出现厚薄不匀现象。 3、染色时应防止染色液干而出现沉淀物，冲洗时不能先倾倒染液应缓缓加水，使沉渣浮起溢去。 临床意义 1．各种白细胞所占的百分比随年龄而有所变化。成人的正常值为中性分叶核50～70%，中性杆状核1～5%，嗜酸性0.5～5%，嗜碱性0～1%，淋巴细胞20～40 % ，单核细胞1～8%。 2、各种白细胞增多和减少常与某种感染、自身免疫性疾病等有关。 油镜的使用 原理：油镜的透镜很小,光线通过玻片与油镜头之间的空气时,因介质密度不同,发生折射或全反射,使射入透镜的光线减少,物象显现不清.若在油镜与载玻片之间加入和玻璃折射率（n=1.52）相近的