重组体的选择与鉴定1材料.ppt

重组体分子的选择与鉴定方法及原理 何为重组体？ 转化子：在DNA分子克隆中，通常将导入外 源DNA分子后能稳定存在的受体细胞称为转化子； 重组体：含有重组DNA分子的转化子； 目的重组体：含有外源目的基因的重组体。 为什么要对重组子进行选择与鉴定 在转化反应中,并非所有的细胞中都转入重组DNA分子,即使所有的受体细胞都变为转化体,所获得的转化子仍是多种类型的DNA分子,因为在连接反应中会有以下几种情况发生: 载体和一个或数个串联目的基因连接 载体发生自连 目的DNA分子发生自连 未发生连接反应的载体和目的DNA片段 为什么要对重组子进行选择与鉴定 因此,在成千上万个转化子中，真正含有期望的重组DNA分子的比例很少，为了将含有外源DNA的宿主细胞和不含外源DNA的宿主细胞分开，以及将含有正确重组子的宿主细胞和含有其他外源DNA的宿主细胞分开，就需要设计出最易于筛选重组子的方案并加以验证。 常用的选择方法 直接选择法 遗传学表型筛选方法一—抗药性筛选 分类： （1）抗药性基因不失活 （2）抗药性基因失活 常用的抗药性选择标记： 氨苄青霉素（Amp）、氯霉素（Cm） 卡那霉素（Kan）、四环素（Tet或Tc） 链霉素（Sm或Str） 抗药性基因不失活 基本原理： 外源基因片段插入载体的位点