菌種代号的意义.docVIP

菌种的传代与保存 菌种代号的意义 国内药品微生物检验所用的菌种代号是 CMCC（F）或 CMCC（B） CMCC —— 中国医学菌种保藏中心 B —— 代表细菌， F ——代表真菌。 大肠杆菌 [CMCC (B) 44102] 乙型副伤寒沙门杆菌 [CMCC (B) 50094] 铜绿假单胞菌 [CMCC (B)10104] 金黄色葡萄球菌 [CMCC (B)26003] 生孢梭菌[CMCC(B)64941] 白色念珠菌[CMCC(F)98001] 常用菌种保藏方法 (一) 菌种保藏的原理 根据微生物的菌种生理、生化特性，在人工创造的条件下尽量降低微生物细胞的代谢强度，使细胞基本处于休眠状态，生长繁殖受到抑制但又不至于死亡，以减低菌种的变异率。低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都有抑制微生物的代谢作用。 低温、干燥、真空是用于菌种保藏的重要手段。 选择保藏方法时，首先应考虑方法能否长期地 保持菌种原有的特性，同时也应兼顾到方法的经济 和简便。在实际工作中，往往多种条件同时使用, 以提高保藏效果。 （二）菌种保藏步骤 ① 挑选特征典型的纯菌菌落； ②确定保藏的合适菌体形态； ③ 选择最适宜的保藏方法； ④定期对保藏菌种进行检查，观察是否发生变化，若有变化，须改变保藏方法。保藏期满应及时进行移种。 1.琼脂斜面低温保存法 （1）方法：将经常使用的菌种的典型菌落接种在斜面（某些特殊菌种可用液体培养基）上，按规定的温度和时间培养，待充分生长后，把培养好的新鲜菌种用牛皮纸保好，为减缓培养基的水分蒸发，延长保藏时间，可将菌种保藏管的棉花塞换成橡胶塞。放在4℃左右的冰箱中保藏。每隔 2~3个月移种一次，继续进行保藏。若用半固体高层培养基穿刺培养，一般可保藏半年 ~ 一年。有的甚至更长时间。 （2）适用范围：细菌、酵母菌、霉菌保藏。 各类菌种保藏条件及时间 菌 种 培 养 基 保存温度 传 种 时 间 细 菌 一般多用于营养琼脂 或根据菌种规定选用培养基 4~6℃ 芽孢杆菌3~6个月， 其它细菌每个月 酵母菌 一般用麦芽汁琼脂或 麦芽汁酵母膏琼脂 4~6℃ 一般4~6个月 丝状真菌 一般用PDA琼脂、蔡氏 每4个月移植一次 （每2个月移植一琼脂或麦芽汁琼脂等 3）特点： 优点是——简便，易于推广；一般不需要另选择保藏用培养基；对大多数微生物都适用。 缺点是——保藏期太短；传代次数多，易发生变异及污染。 （4）注意事项： 保藏的菌种应是生命活力旺盛的新鲜培养物，至少应是第三代的培养物。 保藏时，破伤风杆菌可用庖肉培养基；生孢梭菌用流体硫乙醇酸盐培养基。 必须定期检查保藏菌种冰箱的温度、湿度以及菌种管的棉塞是否松动或生霉，如有异常应及时处理。 每次移植后，应与原菌种的编号、名称逐一核对，确证培养基特征和纯度无误后再继续保藏。 保藏菌种的培养基应无糖，其他菌类含糖小于 2 %为宜，以免产酸过多，影响菌种存活。 铜绿假单胞菌在冰箱中易发生菌体自溶而死亡，不宜用本法保存。 2、液体石蜡保存法： 本法是用石蜡将培养物与空气隔绝，以降低菌种的生理生化水平，并可防止水分蒸发，从而延长菌种的保藏期。1）方法： 将菌种接种于斜面或穿刺于0.3~ 0.5 %琼脂半固体高层培养基中，培养好备用。 取化学纯的液体石蜡装在试管中，每管10~15ml，加棉塞，瓶口包上纸，121℃高压灭菌30min，取出置37℃温箱或 110~ 170 ℃烤箱中 1 ~ 2 h 或干燥器内除去液体石蜡中的水分。 将上述液体石蜡加入培养好的菌种试管内，液体石蜡液面以高出培养基最上端 1 ㎝为宜，将试管直立，放入4℃冰箱中保藏。 适用范围：适用于保藏部分霉菌，酵母菌和放线菌，对细菌保藏效果较差。 （3）特点 本方法简便易行，是实验室常用的一种保藏方法，该法主要使菌种与空气隔绝。 （4）注意事项： ① 保藏时，用新鲜培养物接种，应检查纯度和特征后，方可进行保藏。 ② 保藏过程中，需经常观察斜面是否干燥，如干燥， 需重新移种。 ③ 使用菌种时，先将菌种管倾斜使液体石蜡流至一 边，再用接种针挑取培养物接种到新鲜斜面上培 养，待长出新