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猪瘟诊断技术研究进展 刘雪洋 指导老师苏战强 摘要：猪瘟严重危害养猪业的健康发展，国内外对猪瘟的诊断方法做了大量研究。文章从血清学诊断和分子生物学诊断方法两大方面进行了回顾，并对诊断方法的发展方向做了展望。 关键词：猪瘟；诊断技术 Abstract: The classical swine fever serious harm to the healthy development of the pig industry, a lot of research diagnosis of swine fever at home and abroad. From the two major aspects of the serological diagnosis and molecular biology diagnostic methods were reviewed, and the direction of development of diagnostic methods are put forward. Keywords: classical swine fever; diagnostic techniques 前言：猪瘟（Classical swine fever，CSF）是严重危害养猪业的主要传染病之一，国际动物卫生组织（OIE）将其确定为A类传染病，也是我国农业部规定的出入境检疫的一类传染病。猪瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）属黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属（Pestivirus），另外两个成员是牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）和羊边界病病毒（Border disease virus，BDV）[1]。这3种病毒感染均造成重大的经济损失。 我国在1954年就成功研制出了世界公认有良好免疫效果的猪瘟兔化弱毒疫苗，至今已应用了半个世纪，对我国以及引进兔化弱毒苗的国家的猪瘟疫情控制做出了积极贡献，并得到了高度评价，至今我国没有出现大面积猪瘟疫情暴发。但近年来，原已宣布消灭了猪瘟的一些欧洲国家又报道有猪瘟发生，我国猪瘟的发病率亦呈上升趋势，而且自然病例中常见非典型、温和型或亚急性症状CSFV持续性感染，妊娠母猪带毒综合征以及新生仔猪的免疫耐受等，严重威胁着我国养猪业的发展[2]，针对猪瘟流行的新特点，对猪瘟的诊断检测技术要求越来越高，本文就现在的猪瘟诊断技术进行综述。 1 血清学诊断方法 1.1 琼脂扩散试验(AGP) 琼脂扩散试验是用来检测抗原或抗体的经典实验方法。Molnar建立了琼脂扩散沉淀法，可用病猪脾、淋巴结做抗原进行检测。琼扩试验操作简单，不需特殊仪器，费用低。但特异性和敏感性差，现在猪瘟的诊断一般不采用此方法。 1.2 荧光抗体试验（FAT） 猪瘟荧光抗体检测猪瘟病毒是一种灵敏而又特异的诊断方法，许多国家和地区将冰冻组织切片或触片的直接荧光抗体试验作为猪瘟的法定诊断方法，OIE在《哺乳动物、禽、蜜蜂A和B类疾病诊断试验和疫苗标准手册》中也指定FAT为猪瘟诊断法定方法。可用FAT直接检测扁桃体、脾脏、肾脏和回肠远端冰冻切片中的抗原。也可将病猪扁桃体和脾混合匀浆后接种无瘟病毒污染的猪源细胞（如PK-15），24h～72h后进行飞片FAT试验，检查细胞中是否存在CSFV，这种方法比冰冻组织切片法更为敏感。 1.3间接血凝试验（IHA） 1.3 正向间接血凝试验是利用CSFV致敏红细胞，将待检血清梯度稀释后进行抗原抗体反应，根据红细胞的凝集判断结果。此法能够测出猪瘟抗体效价，有简便易操作的特点。可用于免疫抗体的监测。刘杰标等[3](2002) 对广西宜州市和环江县共790份猪血清进行了猪瘟免疫抗体检测，结果表明两地的猪瘟免疫抗体效价较高，与实际免疫情况基本相符。但此方法的缺点是不能区分抗体水平是由于疫苗免疫还是野毒感染所引起。 1.3. 反向间接血凝试验则是用猪瘟免疫血清提取IgG，致敏绵羊红细胞，用之检测CSFV。此法能够检测组织病料如脾脏、淋巴结、扁桃体中的CSFV抗原。但由于对组织病料处理方法有差异，而且组织中的血细胞易造成干扰，非特异性凝集使得结果判定困难，因而现在已很少应用。 1.4中和试验 1.4 将猪瘟病毒与待检血清中和后接种兔体，观察体温变化曲线。当待检血清稀释度大于1∶32时，则表明待检血清能够保护猪群免受CSFV感染；当待检血清稀释度小于1∶32时；应当对猪群进行免疫接种。由于CSFV和BVDV同源性很高，在血清学上有交叉反应，因而血清要分别和CSFV、BVDV做中和试验，如果CSFV抗体效价高，则可能是感CSFV。但要明确区分CSFV、BVDV还需用单克隆抗体技