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第40讲　克隆技术[考纲要求]　1.植物的克隆(Ⅰ)。2.动物的克隆(Ⅰ)。考点一　植物的克隆1．植物组织培养(1)理论基础：植物细胞的全能性。(2)程序：半固体培养基的配制→小组织块的切取→愈伤组织的获得→新植株的再生。2．植物细胞培养和器官培养的措施通过平衡的植物激素配比进行调控。(1)适量的激动素和细胞分裂素配比，可诱导芽的分化。(2)适量的吲哚乙酸及适当减除其他某些激素，可诱导生根。3．原生质体培养与植物细胞工程(1)原生质体的获得方法：在0.5～0.6 mol/L的甘露醇溶液环境(较高渗透压)下，用纤维素酶和果胶酶混合液处理根尖、叶片、愈伤组织或悬浮培养细胞，除去细胞壁，获得球形的原生质体。(2)植物细胞工程的操作过程外源遗传物质转基因细胞新植株(3)细胞产物的工业化生产：生产一些重要的细胞次生代谢产物(如某些中药)。[思维诊断](1)棉花根尖细胞经诱导形成幼苗能体现细胞全能性(　√　)(2)植物的每个细胞在植物体内和体外都能表现出细胞的全能性(　×　)(3)在诱导离体菊花茎段形成幼苗的过程中，不会发生细胞的增殖和分化(　×　)(4)愈伤组织是外植体通过脱分化和再分化后形成的(　×　)(5)用纤维素酶和果胶酶水解法获得的植物原生质体失去了全能性(　×　)题组　植物组织培养过程分析1．下图表示利用棉花叶肉细胞原生质体培养进行遗传改良的过程，据图分析错误的是(　)A．①过程需在适宜条件下用纤维素酶和果胶酶的混合物处理B．②过程能定向诱导原生质体产生优良性状的突变C．③过程中叶肉细胞失去了其特有的结构和功能D．④过程需用适宜配比的植物激素处理答案　B解析　植物细胞壁主要是由纤维素和果胶组成的，常选用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，获得具有活力的原生质体。紫外线照射诱变育种所依据的原理是基因突变，这种突变是不定向的。③过程是脱分化，指已经分化的植物器官、组织或细胞，当受到创伤或进行离体(也受到创伤)培养时，已停止分裂的细胞，又重新恢复分裂，细胞改变原有的分化状态，失去原有结构和功能，成为具有未分化特性的细胞。④是再分化，需用适宜配比的植物激素诱导。2．下图表示植物组织培养过程。据图分析下列叙述正确的是(　)A．⑤植株根尖细胞的全能性比①植株根尖细胞的强B．②试管的培养基中含有植物生长调节剂，不含有机物C．③试管中的细胞具有细胞质丰富、细胞核和液泡都大的特性D．调节④培养基中植物生长调节剂的比例可诱导产生不同的植物器官答案　D解析　由于⑤是由①上的组织经培养形成的个体，故二者的全能性应该相同，A错；由①到②的过程中植物细胞不能进行光合作用，因而②试管中含有有机物如蔗糖等，故B错；③试管中细胞为愈伤组织细胞，液泡小，故C错。1．植物组织培养的操作流程2．脱分化和再分化的比较比较内容脱分化再分化过程外植体→愈伤组织愈伤组织→幼苗形成体特点排列疏松、高度液泡化的薄壁细胞有根、芽需要条件a.离体b.适宜的营养c.生长素/细胞分裂素的比例适中d.不需光a.离体b.适宜的营养c.生长素/细胞分裂素的比例高或低诱导生根或生芽d.光照考点二　动物的克隆1．动物细胞、组织培养(1)动物克隆的技术基础是动物的细胞和组织培养。(2)动物细胞培养的过程：动物细胞培养包括组织块的切取、组织细胞的分散及细胞培养三个阶段。分散组织细胞常用的方法有机械消化法和胰酶消化法。(3)原代培养和传代培养的含义①原代培养：从机体取出后立即进行的细胞、组织培养的过程。②传代培养：将原代培养细胞分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖。(4)动物成纤维细胞的培养过程：切取组织小片→胰蛋白酶酶解→原代培养→传代培养。2．细胞系和细胞株(1)细胞系的类型：连续细胞系(恶性细胞系：具有异体致瘤性；不死性细胞系：保留接触抑制现象，不致癌)和有限细胞系。(2)细胞株：通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞。可分为连续细胞株和有限细胞株。3．克隆培养法(1)概念：把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术。(2)基本要求：必须肯定所建成的克隆来源于单个细胞。(3)提高细胞克隆形成率的措施有：①选择适宜的培养基；②添加血清；③以滋养细胞支持生长；④激素刺激；⑤使用CO2培养箱；⑥调节pH。4．动物的细胞融合技术及其应用(1)细胞融合①概念：是指在一定的条件下将2个或多个动物细胞融合为一个细胞的过程。②原理：细胞膜的流动性。③诱导融合的方法a．物理方法和化学方法：电激法、聚乙二醇等。b．生物方法：灭活的病毒(如仙台病毒)。(2)细胞杂交①概念：基因型不同的细胞间的融合就是细胞杂交。②过程③应用：由于细胞杂交中染色体容易丢失，利用杂交细胞检测特定染色体丢失与特定基因产物(蛋白质)减少的对应关系可以进行基因定位。(3)杂交