CTC的检测及其在乳腺癌方面的研究进展.docVIP

CTC的检测及其在乳腺癌方面的研究进展 乳腺癌循环肿瘤细胞的检测方法 ?????? CTC检测的方法通常包括富集和检测两个步骤。由于外周血中CTC的数量非常少，一般在106~107个单核细胞中仅含有1个，因此寻找富集CTC的方法显得非常重要，到目前为止绝大多数方法都是利用肿瘤细胞表面特异的标记物来将它们从白细胞中分离出来，其中最常用的上皮标记物是细胞角蛋白(cytokera-tins CKs)，细胞骨架蛋白(cytoskeletal proteins)以及上皮细胞黏附分子(epithelial cellular adhesion molecule，Ep-CAM)。CTC的鉴定必须具有足够的特异性及敏感性，以便将其从循环血液中分离出来。目前主要的方法有富集分离法、逆转录聚合酶链反应法、流式细胞法等。 富集分离法 1?形态大小过滤法 上皮肿瘤细胞大小分离法 (isolation by size of epithelial tumour cells，ISET)是一种根据上皮细胞的大小来分离的方法，ISET主要是利用一个8μm的过滤孔，将较大的CTC与外周血白细胞分开，过滤之后那些假定的肿瘤细胞通过不同的标记物(比如CKs)被固定以及染色。其局限性在于一些较大的白细胞容易与肿瘤细胞混在一起，而一些较小的CTC也容易被滤过而丢失，因此这种方法缺乏较高的敏感性以及特异性。 2?密度梯度离心法