6第四章 酶工程.pptVIP

一是稳定性比天然酶高，使用半衰期比较长； 二是反应后酶与底物容易分开，并可长期反复使用； 三是反应液中没有残留酶，因此易于纯化，产品质量高； 四是具有一定的机械强度，成型后装入酶反应器，可实现连续倾向自动化控制，并使设备小型化，节省能量； 五是酶的利用率高，产品成本低； 六是转化过程基本无三废排出。因此称为（无公害酶）。 2、固定化细胞的性质和特点 细胞固定化后，其中酶的性质，稳定性与固定化酶一样，但因其颗粒微小，难以截留或定位。固定化细胞既有细胞特征又有生物催化剂功能，也具有固相催化剂的特点。其优点主要表现在： 1）、无须进行酶的分离纯化，节省起始投资； 2）、细胞保持原始的生命活动状态，酶在细胞内环境中稳定性较高，进行完整的细胞固定化时，酶活力损失少； 3）、可利用细胞内辅助因子再生系统和酶系统，催化一系列反应； 4）、细胞生长停滞期短，细胞密度大、反应快、抗污染能力强； 5）、可以连续使用，大大节约生长细胞耗用的养料； 6）、应用固定化细胞生物反应器进行连续反应，可避免反馈抑制和产物的分解； 7）、固定化细胞的稳定性大都比游离细胞高。 在使用固定化细胞时，要注意以下问题： 一是必须保持菌体的完整，防止菌体自溶，否则会影响产物纯度； 二是必须抑制细胞内蛋白酶对所需酶的分解作用； 三是细胞内有多种酶存在，会产生副作用产物，必须设法抑制非目的酶的活性，如加入去污剂，热处理等； 四是固定化细胞利用的主要是胞内酶，而细胞膜会对底物和产物的进出造成障碍，因此主要用于小分子底物的反应，而不适用于大分子 底物。 无论采用哪种方法，都必须采取适当的措施来提高细胞膜的通透性，以提高酶的活力及转化效率。 意义：固定化细胞具有极其良好的工业应用前景，它对传统发酵工艺的技术革新改造具有极其重要的影响，有可能逐渐取代发酵工艺。 固定化酶（细胞）的指标： 相对酶活力—具有相同酶蛋白量的固定化酶与游离酶活力的比值。 酶的活力回收率—固定化酶的总活力与用于固定化的酶总活力之百分比。 固定化酶的半衰期—固定化酶的活力下降到初始活力一半所经历的时间。用t1/2表示。 四、酶分子的改造与修饰技术 问题：1、为什么要对酶分子进行改造与修饰？什么是改造？什么是修饰？ 2、酶分子改造与修饰的目的与任务是什么？ 3、理论依据是什么？ 4、手段和方法如何？ 改造原因： 目的和任务： 酶分子改造和修饰的内容： 酶是具有催化活性的生物物质。绝大多数是蛋白质。因此酶分子改造和修饰的内容是通过主链的“切割”、“剪接”和侧链基团的化学修饰，对酶蛋白进行分子改造，以改变酶分子物理化学性质及生物活性或赋给酶新的功能，并最终达到人工设计合成高效的具有生物活性的非天然酶分子。这种技术也称为生物分子工程。 改造—改变蛋白质的一级结构的过程。 修饰—把侧链基团的共价变化。 手段和方法 ： 1）、酶蛋白主链经过水解酶的有限水解作用，去掉部分主链或置换一级结构上某些aa残基，使活性部位的构象发生某些变化，而从达到改性与改构的目的； 2）、用双功能基团试剂将酶蛋白分子间、亚基间或分子内不同肽链部分间进行交联，使分子加固，提高其稳定性； 3）、改变基团的电化学性质，分子内基团的相互作用力与其它物质之间的反应性，从而使酶蛋白分子侧链基团发生化学改变； 4）、利用小分子或大分子 物质对活性部位或活性部位之外的侧链基团进行共价化学修饰（如果所用的化学修饰剂是水不溶性的，就成为固定化酶），以改变酶的稳定性。 （一）、酶的化学修饰 是指用化学手段将某些化学物质或基团结合到酶分子上，或将酶分子某些部分去掉或改变为其它基团，从而改变酶的化学性质，最后达到改变酶的催化性质目的。 （二）、蛋白质工程技术对酶的定向改造 蛋白质工程技术对酶的定向改造，是在基因工程的基础上，通过对结构基因的改造来达到改造酶分子的结构，从而改变酶的性能甚至创造自然界中尚末发现的新酶的目的。 （三）、酶分子改造后的性质及其应用前景 1、性质： 1）、改变酶分子物理化学性质； 2）、改变酶学的主要参数； 3）、增加酶对高温、低温、极端PH值的稳定性； 4）、防止稀释溶液和变性剂作用下变性； 5）、增强对蛋白酶水解作用的抵抗力； 6）、降低生物识别能力（膜结合、免疫原性）和提高对生物膜的渗入或通透性； 7）、延长体内停滞时间； 8）、改变酶分子对体内不同组织的亲和性，使酶在有机溶剂中保持活力； 9）、与抑制剂作用降弱或提高，提高酶学活性； 10）、产生新的生物活性与功能； 11）、对多功能酶可调整其酶谱等。 2、发展前景； 第一是开发新一代生化药物； 第二是为工业开发新型酶制剂； 第三是为生物工程的其它技术指供有效的工具； 第四是在理论研究中具有重要意义。 第四章