第三章分子发光分析概要.pptVIP

在不同的pH值体系中，30℃下，SDS浓度对SBP剩余酶活的影响 pH2.6 SDS(mmol·L-1) 0 0.1 0.25 0.5 2.5 5.0 Residual activity 100 100 50 0 0 0 pH4.2 SDS(mmol·L-1) 0 1 2.5 5.0 10.0 20.0 Residual activity 100 100 50 0 0 0 pH5.2 SDS(mmol·L-1) 0 2.5 5.0 10.0 40.0 80.0 Residual activity 100 60 50 40 30 20 SBP的内源荧光 ←Effect of the SDS concentration on fluorescence Spectra of SBP at pH2.6, 30℃ systems. λex=295nm. Effect of the SDS concentration on fluorescence Spectra of SBP at pH5.2, 30℃ systems. λex=295nm. → 续 (d) 取代基效应 芳香族化合物苯环上的不同取代基对该化合的的荧光强度和荧光光谱有很大的影响。一般说来，给电子基团，如-OH、-OR、-NH2、-CN、-NR2等，使荧光增强。因为产生了p - π共扼作用, 增强了π电子共轭程度，使最低激发单重态与基态之间的跃迁几率增大。而吸电子基团，如-COOH、-C=O、 -NO2、-NO、卤素离子等，会减弱甚至会淬灭荧光。如硝基苯为非荧光物质, 而苯酚、苯胺的荧光较苯强。 2.溶剂对荧光强度的影响 溶剂的影响可分为一般溶剂效应：指的是溶剂的折射率和介电常数的影响。有的情况下，增大溶剂的极性，荧光增强，荧光峰红移。8-巯基喹啉在四氯化碳、氯仿、丙酮和乙腈四种不同的极性溶剂中的情况就是一例（见下表）。 续 8-巯基喹啉的荧光峰的位置和荧光效率与溶剂介电常数的关系 但也有相反的情况。例如苯氨萘磺酸类化合物在戊醇、丁醇、丙醇、乙醇和甲醇五种醇中，随着醇的极性增大，荧光强度减小，荧光峰蓝移。因此，荧光光谱的位置和强度与溶剂极性之间的关系，要看各种物质与溶剂的不同而异。 例：芘的荧光发射光谱 激发波长334nm。芘的荧光发射光谱依次在373 nm、379 nm、384 nm、390 nm 和410 nm 附近出现五重发射峰。其中, 第一发射峰与第三发射峰强度比(I1/I3 )会随着溶液极性的减小而下降。因此, I1/I3常用来表征其所处环境极性的大小, 其值越大表明芘探针所处微环境的极性越大; 反之, 若I1/I3越小则表明芘探针所处微环境的极性越小。 芘在水溶液中的荧光谱 (b)在甜菜碱溶液中的荧光谱 3. 温度对荧光强度的影响 温度对荧光强度的影响较敏感，因此荧光分析时一定要控制好温度。温度上升使荧光强度下降。 主要的原因是分子的内部能量转化作用。当激发分子接受额外热能时，有可能使激发能转换为基态的振动能量，随后迅速振动弛豫而丧失振动能量。 另一个原因是溶液温度下降时，介质的粘度增大，荧光物质与溶剂分子碰撞也随之减少。相反，随着温度上升，碰撞频率增加，使外转换的去活几率增加。 4. 溶液pH值对荧光强度的影响 带有酸性或碱性官能团的大多数芳香族化合物的荧光一般都与溶液的pH有关。因此在荧光分析中要严格控制溶液的pH值。 例Chunxue Yuan, Shohei Saito,Cristopher Camacho, Stephan Irle, Ichiro Hisaki, and Shigehiro Yamaguchi. A π-Conjugated System with Flexibility and Rigidity That Shows Environment-Dependent RGB Luminescence. Journal of the American Chemical Society. 2013, 135, 8842?8845(Received: April 27, 2013. Published: May 30, 2013) Anthraceneimide蒽酰亚胺+cyclooctatetraene环辛四烯 Conformational change of with flexible and rigid π scaffolds, which perturbs the π-conjugation. 续 环境的影响 (a) RGB(red, green and blue) emissions of 1 in PMMA(聚甲基丙烯酸酯) matrix (blue), in CH2Cl2 solution (gre