第三讲基因诊断与基因治疗概要.ppt

* * 逆转录病毒结构: 基因组组成： （1）5’－帽子；3’－尾巴； （2） 每个单链RNA含6个区： 5’-LTR（长末端重复序列） Ψ+ （组装所需的非编码序列） gag（编码衣壳结构蛋白基因） pol（编码反转录酶基因） env（编码外壳蛋白基因） 3’-LTR * * 逆转录病毒生活周期: 1、感染靶细胞 2、利用自身编码的逆反转录酶，以RNA为模板合成DNA。 3、将病毒DNA转运至宿主细胞核 4、病毒DNA整合到宿主染色体 5、以病毒DNA为模板转录RNA 6、在细胞中翻译Gag、Pol和Env蛋白 7、形成衣壳，RNA单链和反转录酶一起包装进衣壳。 8、形成病毒颗粒并分泌到胞外。 * * 逆转录病毒 病毒RNA 宿主细胞 RT RT 逆转录酶 cDNA 双链 插入 基因组DNA 逆转录病毒感染过程 病毒RNA * * 构建逆转录病毒载体： （1）构建重组野生性病毒：插入相关外源基因，改造成DNA载体（包括插入选择性标记），替代病毒的编码基因。 （2）制备辅助细胞（293T细胞），为载体DNA提供其丧失的功能。 （3）载体DNA导入辅助细胞，产生病毒载体。 （4）用病毒载体感染细胞，外源基因在宿主细胞中表达。 * * 逆转录病毒载体的