分子生物学第08章PCR-聚合酶链反应摘要.pptVIP

8 PCR－聚合酶链反应 PCR的特点 PCR的基本原理一 PCR的基本原理二 图8－1 PCR的基本原理 PCR反应的体系 PCR仪 对DNA模板的要求 引 物 图8－2 引物5’端外加BamHⅠ酶切 位点掺入产物的两端 引 物 表8－1 引物 5’ 端修饰技术 Taq DNA聚合酶 Taq DNA聚合酶 PCR的反应体系 PCR的反应体系 循环条件的设定 循环条件的设定 嵌套PCR 嵌套PCR提高产物特异性的原理 反向PCR 锚式PCR RACE 锚式PCR扩增已知序列3’侧序列 锚式PCR扩增已知序列5’侧序列 锚式PCR扩增全长的mRNA序列 不对称PCR 定量PCR 定量PCR中的内标 荧光定量PCR TaqMan荧光探针（线性探针） TaqMan荧光探针工作原理 分子信标（环状探针） SYBR荧光染料 荧光定量PCR仪光路图 PCR产物与载体的连接 PCR产物与载体的A-T连接 mRNA差别显示 利用PCR的定点突变 利用PCR的定点突变 利用PCR的定点突变 分子信标荧光探针的设计与TaqMan荧光探针相似，只不过探针的5’端和3’端的一小段序列被设计成互补的，探针没有与靶序列杂交时会形成茎环结构，R基团和Q基团靠近，不能产生荧光。当分子信标与靶序列杂交时，茎环结构被展开，使得R 基团和Q基团分开足够远，Q基团对R基团的荧光淬灭作