第5章分子发光精读.ppt

第五章 分子发光分析法Molecular Luminescence Analysis §1、分子荧光和磷光分析 §1、分子荧光和磷光分析 一、原 理 1、荧光和磷光的产生 处于基态的物质分子吸收了能量而被激发，它跃迁回基态所发射的电磁辐射，称为荧光和磷光。 S0 分子的基态 S1 第一电子激发单重态 S2 第二电子激发单重态 T1 第一电子激发三重态 T2 第二电子激发三重态 υ=0、1、2、3、…表示基态和激发态的振动能级 处于激发态的分子是很不稳定的，它可能通过辐射跃迁和无辐射跃迁的形式去活化(去激发)释放出多余的能量而返回基态。 (5)磷光发射(Phosphorescence emission,PE)— 激发态的电子 荧光与磷光的根本区别： 荧光 激发单重态最低振动能层?基态各振动能层 磷光 激发三重态最低振动能层?基态各振动能层 2、激发光谱和发射光谱 荧光和磷光均属于光致发光，都涉及到两种辐射: ★镜像规则 通常荧光发射光谱和它的吸收光谱呈镜像对称关系。 吸收光谱: 基态 因此荧光光谱的形状和吸收光谱的形状极为相似。 3、荧光和分子结构的关系 分子产生荧光必须具备两个条件： ★共轭效应 容易实现 ???? 激发的芳香族化合物容易发生荧光。 此外，增加体系的共轭度，荧光效率一般也将增大。 例如，在苯中的荧光效率 ph（CH=CH）2 ph 0.28 ph（CH=CH）3 ph 0.68 原因 ： 由于增大荧光物质的摩尔吸光系数，有利于产生更多的激发态分子，从而有利于荧光的发生。 ★ 取代基效应 给电子基团，如-OH、-OR、-CN、-NH2 、 -NR2等，使荧光增强。 原因： 产生了p-?共轭作用，增强了?电子共轭程度，使最低激发单重态与基态之间的跃迁几率增大。 4、溶液的荧光（或磷光）强度 (1)荧光强度与溶液浓度的关系 当入射光强度I0 和l一定时： If = K c ★温度对荧光强度的影响 ★溶液pH值对荧光强度的影响 ★内滤光作用和自吸收现象 溶液中若存在能吸收激发或荧光物质所发射光能的物质，就会使荧光减弱，这种现象称为“内滤光作用”。 荧光物质的荧光发射光的短波长的一端与该物质的吸收光谱的长波长一端有重叠?。 在溶液浓度较大时，一部分荧光发射被自身吸收，产生“自吸收”现象而降低了溶液的荧光强度。 （3）溶液荧光猝灭 荧光物质分子与溶剂分子或其它溶质分子的相互作用引起荧光强度降低的现象称为荧光猝灭。 能引起荧光强度降低的物质称为猝灭剂。 二、荧光分析仪 1、激发光源 在紫外-可见区范围，通常的光源是氙灯和高压汞灯。 2、样品池 荧光用的样品池须用低荧光的材料制成，通常用石英，形状以方形和长方形为宜。 3 、单色器 光栅有两块，第一块为激发单色器，用于选择激发光的波长，第二块为发射单色器，用于选择荧光发射波长。 4、检测器 由光电管和光电倍增管作检测器，并与激发光成直角。 三、分子荧光分析法及其应用 1、荧光分析法的特点 ★ 灵敏度高  荧光分析法的灵敏度比吸光分析法高2～4个数量级，检测下限在0.1～0.001μg·mL－1之间。 ★ 选择性好 荧光分析法的光谱比较简单，特征性强，而且有激发光谱和发射光谱，选择的余地大。 ★荧光法提供比较多的物理参数 激发光谱、发射光谱、荧光强度、荧光效率、荧光寿命等多种物理参数。 2、定量测定方法 ★校准曲线法 ★比较法 3、荧光分析法的应用 ★无机化合物的分析 ???? ?直接荧光法 待测元素与有机试剂所组成的能发荧光的配合物，通过检测配合物的荧光强度以测定该元素的含量。这种方法称为直接荧光法。 现在可以利用有机试剂以进行荧光分析的元素已达到70多种。较常用有机试剂进行荧光法测定的元素为铍、铝、硼、镓、硒、镁、锌