第二章海洋药用活性化学成分分离分析的基本方法.ppt

（1）碘化汞钾试剂(Mayerr试剂)：取水溶液加盐酸至酸性，或取酒精提取物稀盐酸溶解部分，加碘化汞钾试剂，如有白色或淡黄色沉淀可能含有生物碱。因为反应沉淀物能溶解于该试剂中，所以试剂不能加得过多。 生物碱 （2）碘化铋钾试剂(Dragendorff试剂)： 试样同上，也呈酸性，加碘化铋钾试剂立即有橘红色或黄色沉淀出现亦可能有生物碱。本反应于纸片上进行较为敏感。 生物碱 （3）硅钨酸试剂： 1g硅钨酸溶于20mL水中，加10％盐酸使呈酸性。试液如有生物碱，与硅钨酸试剂相遇即产生灰白色或浅黄色沉淀。（碱性氨基酸、内酯化合物和生物胺也发生类似显色反应。） 生物碱 （1）茚三酮（Ninhydrin）试剂： 样品点在纸片上，滴上或喷洒0.2％茚三酮酒精溶液后，在100℃左右的烘箱中放置2min，如有氨基酸和肽，就呈紫红色或蓝色斑点，也有少数氨基酸呈黄色斑点。亦可以在试管中进行，取水提取液lmL加试剂2～3滴而后在沸水浴上加热5min，冷后有蓝或蓝紫色出现表明有氨基酸或多肽。 氨基酸和肽 （2）吲哚醌（Isatin 试剂）溶液： 100mL1％的吲哚醌丙酮溶液，加10mL醋酸即可。将样品点在纸上，滴上或喷洒吲哚醌试剂后，用吹风机吹干，在120℃加热5min就呈各种颜色。本试剂主要对氨基酸、氨基酸衍生物及小肽有颜色反应，肽越大灵敏度越差。 氨基酸和肽 （3）双缩脲反应： 试剂为1％硫酸铜和40％氢氧化钠溶液等量混合。本试剂主要是Cu＋＋与蛋白质或肽分子中肽键－CO－NH 络合呈色。取1ml水浸液加入上述试剂，振摇，冷时显紫红表示可能有蛋白质或肽。 氨基酸和肽 （4）酸性蒽醌紫(商品名：Solway purple)： 100 mL 0.05％酸性蒽醌紫溶液，加0.5 mL硫酸即成。将水浸出液点在纸片上，就呈紫色。氨基酸、肽均不显色。 氨基酸和肽 （5）溴百里蓝钠盐溶液： 将水浸出液点在纸上，喷洒上述试剂，就呈此紫色或绿色。若显色不够明显，稍烘一下即可，背景为黄色。 氨基酸和肽 用酸性蒽醌紫、溴百里蓝钠盐溶液、双缩脲反应来鉴别，方法同上。 蛋白质 （1）费林试剂(Fehling试剂)： 水浸液试样加费林试剂，在沸水浴上加热数分钟。如果产生红色的氧化亚铜沉淀，证明含有还原糖。若试样不含还原糖，可将水浸液加少量盐酸煮沸约30min，加氢氧化钠溶液中和至碱性，然后加费林试剂在沸水浴上加热数分钟。如果产生红色沉淀，就可能含有配糖体或者多糖类化合物。 糖、多糖和配糖体（甙） （2）α－萘酚试剂（Molish试剂）： 配置10％的α－萘酚乙醇溶液。样品以稀乙醇或水溶解，置试管内，加入α－萘酚试液数滴，此后再沿着试管壁滴加少量浓硫酸，如与浓硫酸的接触面产生紫红色环即有还原糖或其他还原性物质存在。 糖、多糖和配糖体（甙） （3）氨性硝酸银试剂： 0.1N硝酸银溶液和5N的氨水等量混和。样品点再纸上，喷洒上述试剂，再100℃加热5～10min，还原糖就呈褐色。 糖、多糖和配糖体（甙） （4）苯胺－邻苯二甲酸盐： 苯胺0.93g和邻苯二甲酸1.6g溶于100mL水饱和的正丁醇中。将样品点在纸上，喷洒上述试剂，在105℃加热5min，还原糖就呈桃红色。有时也呈棕色斑点，一般来讲，呈红色的为戊醛糖和2－己酮糖酸，呈棕色的为己醛糖和5－己酮糖酸。 糖、多糖和配糖体（甙） （5）间苯二胺试剂： 0.2N间苯二胺70％乙醇溶液。将样品点在纸上，喷洒上述试剂，在在105℃加热5min呈黄色荧光即证明含糖。 糖、多糖和配糖体（甙） 蒽醌类 （1）1％硼酸水溶液：将乙醇提取液点于纸片上喷洒上述试剂，就呈黄、橙、红色荧光。 （2）10％氢氧化钾水溶液：将乙醇提取液点于纸上，喷洒上述试剂，就呈黄、橙、红色荧光。 （3）5％醋酸镁的甲醇溶液：将乙醇浸取点在纸片上，喷洒上述试剂，就呈橙红色、紫色。 黄酮类 （1）1％的三氯化铝乙醇溶液(或5％三氯化铝水溶液)： 将样品点在纸上，喷洒上述试剂，干燥后，黄色斑点于紫外荧光灯下显明显荧光。 （2）浓氨水溶液： 把进行层析后的滤纸在浓氨水瓶上熏，立即置于荧光下产生极明显的黄色荧光斑点。 黄酮类 （3）盐酸镁粉反应： 取酒精提取液1mL于试管中加镁粉或锌粉适量，再注入浓盐酸数滴(1次加入)，在泡沫处如呈桃红色则可能含有黄酮体。 在水 浸液中也可进行：取水浸液3～4mL在蒸发皿内蒸干，再加95％乙醇加热使溶解(不溶物不用过滤